1方法
1.1中药水煎剂制备
取五倍子、黄芩、黄连定量,研碎后分别加入10倍的水加热,温度以煮沸为度,时间30min。过滤沉渣后,药渣再次煮沸同第1次。取2次药汁混合后进行蒸发,药物浓度以100g/100mL为度,灭菌后备用。
1.2菌悬液制备
将活化后储存于4℃冰箱内的大肠埃希菌标本取出后,种植于新鲜琼脂斜面上,放置于生物保鲜柜内进行培养,时间为18h~24h。到达指定时间后取出琼脂培养基生理盐水冲洗菌苔,生理盐水用量约2~3mL。完成后取发育良好菌落用生理盐水调制为含菌量1.5×108cfu/mL的菌液。
1.3最低抑菌浓度(MIC)测定
取三角烧瓶10支分别加入MH琼脂25mL。于第1支烧杯中加入准备好的五味子水煎剂25mL,摇匀后取25mL加入第2支烧杯,摇匀后取25mL加入第3只烧杯,以此类推使五味子药物最终浓度达到0.98g/L,高压灭菌后置于平板上。将受试菌稀释为浓度107cfu/mL菌液,用微量移液器取1μL分别接种于含药量500,250,125,62.5,31.25,15.6,7.8,3.9,1.95g/L共9种药物浓度培养基上,保持接种点最低含菌104个,并进行详细编号,以免混淆。药液干燥后将平板置于35℃温箱内进行培养,约16h~20h后进行观察。黄芩、黄连方法同上述五味子测定方法。
1.2观察指标[2]
肉眼观察平板上细菌生长情况,以20h后大肠埃希菌无明显生长为最低抑菌浓度。
2结果
2.13种中药体阳性组MIC结果
五倍子、黄芩MIC范围均在31.25~62.5mg/mL,黄连MIC范围在62.5~125mg/mL。五倍子MIC平均范围为(34.45±10.12)mg/mL,黄芩MIC平均范围为(42.16±13.29)mg/mL,黄连MIC平均范围为(87.52±32.46)mg/mL。见表1。
2.23种中药体阴性组MIC结果
五倍子、黄芩、黄连MIC范围与阳性组相同,但平均值略有差异,五倍子MIC平均范围为(32.86±9.89)mg/mL,黄芩MIC平均范围为(40.68±15.42)mg/mL,黄连MIC平均范围为(86.41±33.42)mg/mL。见表2。
2.3阳性组与阴性组MIC平均值对比阳性组与阴性组MIC平均值对比,3种中药均无明显差异(P>0.05)。见表3。
3讨论
抗生素的发现和使用,使得临床上对多种细菌感染性疾病得以有效控制,但由于目前存在抗生素不合理使用和滥用的情况,导致细菌耐药性(尤其是多重耐药菌的产生)严重,效率降低。不合理使用抗生素和滥用抗生素可以使机体正常菌群失调,发生内源性医院感染[3]。同时,若长期使用,易诱导多重耐药的条件致病菌、真菌的二重感染,增加治疗的难度。中药几千年来为中国人的健康做出了重大贡献,在现代预防和控制细菌性感染疾病方面也发挥了积极作用。由于中药的特殊性,细菌较少对中药产生耐药,中药中清热药物具有和抗生素相同的作用,可以起到抑菌或杀菌作用[4]。为更好地研究中药清热药物对细菌的作用,我院将五倍子、黄连、黄芩对产β-内酰胺酶及不产β-内酰胺酶大肠埃希菌的抑菌作用进行了MIC测定。阳性组五倍子、黄芩最低抑菌浓度(MIC)范围均在31.25~62.5mg/mL,黄连MIC范围在62.5~125mg/mL;五倍子MIC平均范围为(34.45±10.12)mg/mL,黄芩MIC平均范围为(42.16±13.29)mg/mL,黄连MIC平均范围为(87.52±32.46)mg/mL。阴性组五倍子、黄芩、黄连MIC范围与阳性组相同,但平均值略有差异,五倍子MIC平均范围为(32.86±9.89)mg/mL,黄芩MIC平均范围为(40.68±15.42)mg/mL,黄连平均范围为(86.41±33.42)mg/mL。2组MIC平均范围对比,无明显差异(P>0.05)。说明3种中药均具有明显抑菌作用,且对产β-内酰胺酶或不产β-内酰胺酶大肠埃希菌最低抑菌范围相当,无明显差异。
作者:权建文 李博 单位:运城市中心医院