1仪器和材料
TU-1800SPC紫外分光光度计;2DHG-9240电热恒温鼓风干燥箱;HH-S数显恒温水浴锅;DFY-C大德快速开盖万能高速粉碎机;D-无水葡萄糖标准品(中国药品生物制品检定所，批号:200302);L-Tyrosine(SigmaT3754);水为超纯水，其他试剂均为分析纯;家养鸡及白羽鸡鸡内金均由福建亿农药业发展有限公司提供，经福建中医药大学药学院范世明高级实验师鉴定为雉科动物家鸡GallusgallusdomesticusBrisson的干燥砂囊内壁。鸡内金的3种炮制品分别依照2010版《中国药典》一部附录中炮制通则进行炮制。
2方法与结果
2.1粘多糖含量测定
2.1.1对照品溶液制备:称取葡萄糖100mg，精密称定，溶解并定容于100mL容量瓶中，摇匀，冷藏备用。
2.1.2供试品溶液制备:称取鸡内金粉末(过60目筛)2.0g，精密称定，索氏提取法进行脱脂8h，于60℃烘干。将上述样品加入1.5mol·mL－1NaOH溶液50mL，45℃水浴提取50min，然后离心15min(4000r·min－1)，吸取上清液，即为供试品溶液。
2.1.3测定方法:分别精密量取对照品溶液适量和供试品溶液150μL，各加入5%苯酚1mL，浓硫酸6mL，于100℃保温15min，冰水浴15min，室温放置15min，于484nm波长处测定吸光度A。
2.1.4方法学考察:①线性关系的考察:精密量取贮备液10mL，配制成0.10mg·mL－1溶液。精密量取50、200、400、600、700μL于5支25mL具塞试管中，用水稀释至1mL，余按“2.1.3”，纯水为空白对照。以葡萄糖含量x为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线y=0.8970x－0.0032，r=0.9995，葡萄糖含量在0.05～0.07mg范围内呈良好线性关系。②稳定性试验:取同一样品粉末2.0g，精密称定，按上述“2.1.2”和“2.1.3”方法操作，室温放置0、2、4、6、8、10、12h，在484nm波长处分别测定样品吸光度，计算ＲSD为1.32%。③重复性试验:取同一样品粉末6份，每份2.0g，精密称定，按上述“2.1.2”和“2.1.3”方法制备、检测，计算ＲSD为0.86%。④回收率试验:取鸡内金供试品溶液100μL6份进行加样回收并按“2.1.2”和“2.1.3”项下方法进行操作，平均回收率为97.77%，ＲSD为1.8%。
2.1.5样品的测定:取白羽鸡和家养鸡鸡内金3种炮制品各3份，于“2.1.2”和“2.1.3”项下方法进行操作。
2.2胃蛋白酶含量测定
2.2.1供试品溶液的制备:称取鸡内金样品粉末(过60目筛)1.0g，精密称定，加盐酸溶液30mL，溶解并定量稀释制成样品溶液。
2.2.2对照品溶液制备:称取酪氨酸对照品50mg，精密称定，加盐酸溶液(取1mol·L－1盐酸溶液65mL，加水至1000mL)100mL溶解并定量稀释制成每1mL中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.3测定方法:取试管6支编号1～6，向试管1～3加入对照品溶液1mL，向编号4～6试管中各加入供试品溶液1mL，置37℃水浴中，保温5min，加入预热至37℃±0.5℃的牛血红蛋白试液5mL，摇匀，并准确计时，在37℃±0.5℃水浴中反应10min，立即加入5%三氯醋酸溶液5mL，摇匀，取续滤液备用。另取试管2支，各加入牛血红蛋白试液5mL，其中一支加入供试品溶液1mL，另一支加入上述盐酸溶液1mL，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照。
2.3淀粉酶含量测定
测定方法:称取鸡内金粉末2.0g，精密称定，于100mL量瓶中，并加入7mLpH5.6磷酸缓冲液后加蒸馏水至刻度，分别吸取两份上清液25mL于50mL量瓶中，加入10mL2%淀粉液，一份(对照)加热煮沸1min，然后两瓶同时在40℃烘箱内放置2h，取出后加入4mL8%草酸，水浴加热15min，冷却后加入一滴酚酞，以1mol·L－1氢氧化钠中和，并以超纯水稀释至刻度。白羽鸡、家养鸡鸡内金及其炮制品均按照以上步骤处理。
3讨论
3.1粘多糖有广谱抗癌作用，并在抗病毒、抗辐射、促进免疫、抗凝血等方面具有良好活性，目前已得到了广泛的重视和研究，并已应用于医药、化妆品等行业〔3〕。动物体内的多糖除了能作为代谢的糖原外，基本上属于粘多糖，本文采用碱提取法提取鸡内金中粘多糖并采用紫外分光光度计法测定含量，实验结果表明，白羽鸡与家养鸡的粘多糖含量均为:醋淬品＞生品＞清炒品。该方法稳定、重现性好、灵敏度高。
3.2本文采用《中国药典》方法对其胃蛋白酶活力进行测定，以产生1μg分子酪氨酸相同的吸收度作1个胃蛋白酶活力单位。实验结果表明白羽鸡与家养鸡鸡内金胃蛋白酶含量均为醋淬品＞清炒品＞生品，这可能与胃蛋白酶在酸性环境中活力较强，对温度不敏感有一定的关系。采用滴定法测定淀粉酶活力，实验结果表明白羽鸡鸡内金淀粉酶活力:生品＞清炒品＞醋淬品，家养鸡的则为生品＞醋淬品＞清炒品。这可能与淀粉酶对温度相对较敏感，加热炮制后活性有所下降有一定的关系。
作者：蔡真真 程再兴 林丽虹 陈红 单位：福建中医药大学药学院
