摘要:目的:探讨葛根芩连汤对牙周炎大鼠的疗效及血清炎症因子的影响。方法:将65只Wistar大鼠随机分为健康对照组(n=15)与牙周炎模型组(n=50)。模型组大鼠造模成功并验证成功后(n=5)，将其随机分为三组(M1、M2、M3)，分别行生理盐水、葛根芩连汤及甲硝唑灌胃治疗。治疗1个月后，检测各组大鼠牙周指数PD、AL;并采用ELISA法检测各组大鼠治疗前后的血清炎症因子(hs-CＲP、TNF－α、IL－1β)水平并加以对比。结果:M2、M3组PD，AL均较M1组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，其中M2组降低较M3足更为明显(P＜0.05);进行药物治疗后，M2、M3组hs-CＲP、IL－1β及TNF－α均较M1组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，其中M2组降低较M3足更为明显(P＜0.05)。结论:葛根芩连汤可以有效的降低牙周炎大鼠血清炎症因子的水平，疗效较佳。
关键词:牙周炎;葛根芩连汤;TNF－α;hs-CＲP;IL－1β
周炎是一种常见的慢性炎症性疾病，多由细菌菌斑生物膜引起，牙周支持组织受损较为严重，如不及时治疗，将导致牙周组织稳定性减退，最终采取拔除牙齿来避免炎症的进一步扩散［1］。目前较为常用的治疗方法有药物治疗与手术治疗，但西医药物治疗存在一定的副反应，且复发率较高;手术治疗虽可以直接切除病灶，但过程较为复杂，且一些老年患者并不能耐受手术。有报道称［2］，葛根芩连汤对于治疗牙周炎效果较佳，不仅可以有效的降低牙周组织内的炎症因子水平，还可以促进牙周组织再生。本研究通过建立牙周炎大鼠模型，观察葛根芩连汤对于牙周炎大鼠的治疗效果及血清炎症因子的影响，以期为临床治疗提供参考。
1材料与方法
1.1实验动物与试剂健康成年雄性Wistar大鼠65只(采购于昭衍新药研究中心有限公司，货号OＲ－2001)，体质量(200±15)g，大鼠分笼饲养，正常光照，自由饮水和摄食，温度22℃，相对湿度50%～70%。葛根芩连汤合剂由葛根(1110035)、黄芩(1202152)、黄连(1111019)、炙甘草(1112083)组成(由唐山市中医医院提供);甲硝唑片(由亚宝药业集团有限公司提供，国药准字H14020964)。1.2方法1.2.1动物分组及模型建立将65只Wistar大鼠随机分为健康对照组(n=15)与牙周炎模型组(n=50)。牙周炎大鼠模型建立参考文献方法［3］，大鼠称重后，10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔内注射麻醉，仰卧位固定后，采用0.2mm正畸弓丝结扎左侧上颌第二磨牙牙颈部并置于龈沟内，放置时应结扎牢固，防止大鼠咀嚼时脱落，术后饲以高糖饮食，持续10周建立牙周炎模型。模型组大鼠造模成功后处死5只大鼠，经HE染色观察左上颌第二磨牙组织形成牙周附着丧失(attachmentloss，AL)，即为造模成功［4］。验证造模成功后将模型组余下的大鼠随机分为三组(M1、M2、M3)，每组各15只。分别行生理盐水、葛根芩连汤及甲硝唑灌胃治疗。1.2.1药物治疗根据《药理实验方法学》［5］等剂量系数折算法d大鼠=6.3×d人(d:剂量，单位mg/kg)，按照大鼠的标准体重200g换算临床用药剂量。对照组与M1组0.9%生理盐水剂量:2ml/(kg•d);M2组葛根芩连汤剂量:0.42g/(kg•d);M3组甲硝唑剂量:0.05g/(kg•d)。1.3观察指标1.3.1组织病理学观察所有Wistar大鼠经过治疗12周后处死大鼠，取左侧上颌第二磨牙及牙周组织，于4%甲醛溶液中固定，再用10%EDTA脱钙。石蜡包埋切片，切片厚度5μm，行HE染色后，采用O-lympus光学显微镜(BX－53型)图像采集及分析系统精确测量大鼠牙周袋深度(PD)、附着丧失(AL)［6］。1.3.2血清炎症因子检测取大鼠腹主动脉血，3000r/min离心10分钟收集血清，血清常温复融。采用散射比浊法检测hs-CＲP(德国西门子公司hs-CＲP检测试剂盒及BNProspec特种蛋白分析仪)。采用酶联免疫吸附(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)法检测TNF－α、IL－1β(美国SET公司试剂盒，荷兰Denley公司MK2)酶联分析仪。1.4统计学分析处理本次研究中数据所用的统计学分析选用SPSS15.0软件，计量资料用均数±标准差(x－±s)表示，两组间的比较采用t检验，P＜0.05，提示数据差异具有统计学意义。
2结果
2.1组织病理学观察正常对照组:牙龈结构完整无萎缩，结合上皮、沟内上皮结构正常，牙槽骨结构完整无异常。经药物治疗后，M1组:牙龈萎缩，结合上皮与牙面分离，可见大量炎症细胞浸润，牙槽骨吸收、破坏，牙周膜纤维排列紊乱。M2、M3组牙周组织炎性细胞浸润较M1组明显减轻。AL与PD测定结果，M2、M3组PD、AL均较M1组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，其中M2组降低较M3足更为明显(P＜0.05)(表1，图1A～D)。2.2各组大鼠血清炎症因子ELISA检测结果M1组大鼠的hs-CＲP、IL－1β及TNF－α均较对照组升高，差异具有统计学意义(P＜0.05);进行药物治疗后，M2，M3组hs-CＲP、IL－1β及TNF－α均较M1组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，其中M2组降低较M3足更为明显(P＜0.05)，见表2．
3讨论
牙周炎是一种常见的慢性感染性疾病，一般认为牙菌斑是引起牙周炎的始动因子，通过细菌代谢产生的毒性物质破坏牙槽骨及牙周组织。但目前有研究认为［7］，其通过激活宿主免疫应答产生的炎症因子在疾病的发生发展中起了很大作用。TNF－α可以激活前破骨细胞成熟，增强了对牙槽骨的破坏，还可以导致胶原纤维的破坏，限制牙周组织的修复［8］。hs-CＲP是由肝脏合成的急性时相反应蛋白，其水平的高低与宿主感染程度成正比。IL－1β在牙周炎的中主要的靶细胞之一是牙周膜成纤维细胞(Humanper-iodontalligamentfibroblasts，HPLFs)，其细胞膜表面相应的受体(IL－1ＲA)与IL－1β相结合，产生多种生物学效应［9］:如抑制HPLFs向成骨细胞分化;诱导前列腺素E2的合成，促进骨吸收;IL－1β和TNF－α一起可诱导IL－6的产生，加重牙槽骨的破坏。在中医中，牙周炎属于“齿衄”，主要由胃热、肾虚导致。葛根芩连汤由葛根、黄芩、黄连和甘草构成。黄芩、黄连可清肠胃之邪热，其中黄连提取物盐酸小檗碱可促进骨钙素的形成;甘草主要用来使各药物疗效协调;最主要的成分是葛根，可解肌表之邪热，其所含的葛根素能促进成骨的生成，还可以抑制骨吸收作用［10］。因此，葛根芩连汤具有解热，增强免疫力，促进骨质恢复等疗效。在本研究中，经过治疗后，M2、M3组PD、AL均较M1组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，其中M2组降低较M3足更为明显(P＜0.05)。通过HE染色也可发现，经过葛根芩连汤治疗的大鼠，其炎性细胞浸润较少，骨质破坏较轻。说明，葛根芩连汤可抑制牙槽骨吸收。我们又对血清中的炎症因子检测发现，进行药物治疗后，M2、M3组hs-CＲP、IL－1β及TNF－α均较M1组明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，其中M2组降低较M3足更为明显(P＜0.05)。说明葛根芩连汤能有效的降低牙周炎大鼠的血清hs-CＲP、IL－1β及TNF－α等炎症因子的水平，显著改善骨质结构。综上所述，葛根芩连汤可以有效的降低牙周炎大鼠血清炎症因子的水平，疗效较佳。
参考文献
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［8］赵玮，余占海，高承志．盐酸小檗碱对实验性牙周炎牙周组
作者：汪庆 姜军松 王丹 庚若琪 韩华 沈梦 单位：中国人民解放军第九八医院口腔科
