1测定波长的选择
取溶液制备项下的各溶液，以相应试剂为空白，用分光度计在500～700nm处扫描，记录扫描图，结果对照品溶液、供试品溶液在620nm处均有最大吸收，空白溶液在此波长处无吸收，说明样品中的其它物质对测定无干扰，确定620nm为检测波长(见图1)。曲线方程的建立:精密吸取浓度为0.150mg•mL－1的无水葡萄糖对照品溶液0.1、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mL于刻度试管中，各加水至2mL，混匀，再分别加入0.2%蒽酮-硫酸试液6mL，静置30min，使其反应充分并待温度降至室温后，摇匀，即得每mL含无水葡萄糖1.88、5.63、11.25、16.88、22.50、28.12、33.75μg的溶液，以相应试剂为空白，在620nm处测定吸收度，以吸收度值为纵坐标，浓度为横坐标得曲线方程为y=0.039X－0.0069(r=0.9998)，无水葡萄糖在1.88～33.75μg•mL－1范围内呈良好的线性关系。相关试验:①精密度:取溶液制备项下经染色后的对照品溶液，以相应试剂为空白，在620nm处测定吸收度，重复操作5次，结果ＲSD为1.02%;②稳定性:取溶液制备项下经染色后的对照品溶液，以相应试剂为空白，在620nm处，分别于0，1，2，3，6h测定吸收度，结果ＲSD为1.72%;③重复性:平行精密称取批号为20131012的复方白及乳膏样品5份，每份2g，按溶液制备项下方法制备供试液，以相应试剂为空白，在620nm处测定吸收度，计算白及多糖含量，结果为4.03mg•g－1，ＲSD为1.44%;④回收率试验:精密称取已测知含量的复方白及乳膏样品(批号20131012)1g，共9份，每3份1组，分别按样品含量的80%、100%、120%精密加入适量对照品溶液，按溶液制备项下供试品溶液制备方法制备，以相应试剂为空白，在620nm处测定吸收度，计算含量，结果平均回收率为98.3%，ＲSD为1.81%。⑤含量测定:取样品3批，各精密称取2g，按溶液制备项下供试品溶液方法制备，以相应试剂为空白，在620nm处测定吸收度，计算白及多糖的含量(见表1)。根据理论投料量、回收率、实际测得白及多糖的量，确定该乳膏中白及多糖的标示含量应为4.0mg•g－1(±10%)。
2尿素含量测定
2.1溶液的制备
①对照品溶液:精密称取尿素对照品25.2mg，置50mL容量瓶中，加乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，得0.504mg•mL－1溶液，精密吸取该溶液3mL于25mL容量瓶中，精密加入对二甲基苯甲醛溶液10mL，用乙醇稀释至刻度，摇匀，在暗处放置15min，即得;②供试品溶液:精密称取样品0.5g，于烧杯中，加入乙醇约30mL，在水浴上加热搅拌使溶解，置冰水浴中冷却30min，滤过至100mL容量瓶内，用乙醇洗涤烧杯3次(每次约15mL)，合并洗液，定容，摇匀，取该溶液3mL于25mL容量瓶中，精密加入对二甲基苯甲醛溶液10mL，用乙醇稀释至刻度，摇匀，在暗处放置15min，即得;③空白溶液:精密称取不含尿素的样品0.5g，按供试品溶液制备方法制备，即得。
2.2干扰试验
取溶液制备项下的各溶液，以相应试剂为空白，用紫外分光度法在300～500nm处扫描，记录扫描图，除空白溶液外，对照品溶液、样品溶液在420nm处均有最大吸收，基质中的其他组份对测定无干扰(见图2)。
2.3曲线方程的建立
分别精密吸取浓度为0.504mg•mL－1对照品溶液，0.5mL、1.5mL、3.0mL、4.5、6.0mL于25mL容量瓶中，各精密加入对二甲基苯甲醛溶液10mL，用乙醇稀释至刻度，摇匀，在暗处放置15min，即得每mL含尿素10.0μg，30.0μg，60.0μg，90.0，120.0μg的对照品溶液，以相应试剂为空白，在420nm测定吸收度，以吸收度值为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，得曲线方程为:Y=0.0077X+0.0019(r=0.9995)，尿素在10.0～120.0μg•mL－1范围内线性关系良好。
2.4相关试验
①精密度:取“3.1”项下经染色后的对照品溶液，以相应试剂为空白，在420nm处测定吸收度，重复操作5次，结果ＲSD为0.92%;②稳定性:取“3.1”项下的对照品溶液，以相应试剂为空白，分别于0、1、3、6、12h在420nm处测定吸收度，结果ＲSD为1.66%;③重复性:平行精密称取5份样品，每份0.5g，按“3.1”项下方法制备供试液，以相应试剂为空白，在420nm处测定吸收度，计算尿素的平均含量，结果为98.9mg•g－1，ＲSD为1.64%;④回收率:精密称取已测知含量的复方白及乳膏(批号20131012)0.25g，共9份，每3份1组，分别按样品含量的80%、100%、120%精密加入对照品溶液适量，按“3.1”项下方法制备供试液，以相应试剂为空白，在420nm处测定吸收度，计算回收率，结果平均回收率为99.1%，ＲSD为1.49%。
2.5含量测定
〔5〕取样品3批，批号分别为20131012，20131015，20131020，各精密称取约0.5g，按“3.1”项下方法制备供试液，以相应试剂为空白，在420nm处测定吸收度，计算含量(见表2)。根据理论投料量、回收率、实际测得尿素的量，确定该乳膏中尿素的标示含量应为100.0mg•g－1(±10%)。
3讨论
复方白及乳膏中的主要活性物质为白及多糖和尿素，多糖具有促进皲裂愈合、抗炎的作用，尿素具有溶解和软化角质、祛色斑的作用〔6〕，对这两种药理成分进行质量控制不仅是保证质量的关键，也是制剂申报的核心内容。乳膏基质是脂性物质，而多糖是水溶性物质，在鉴别和测定总多糖时，样品均须先使用三氯甲烷-无水乙醇混合液将基质溶解，使多糖充分析出，然后加水溶解，才便于鉴别和检出。实验时曾分别比较使用水、无水乙醇、三氯甲烷-无水乙醇混合液做溶剂，前两者均不如三氯甲烷-无水乙醇混合液溶解基质效果好，应注意三氯甲烷的使用量，过量，含测时染色后的供试液有荧光、分层，影响吸光度测定，用量偏少则基质溶解不完全，糖析出不充分，影响检出结果。乙醇为有机溶剂，能有效的溶解所有脂溶性基质及其它有机物，白及多糖为水溶性物质，在乙醇中难溶，当样品中尿素、基质经乙醇溶解后，多糖及部分未溶解的基质成分在冰浴时迅速聚集，经过滤除去，所得溶液澄清，有利于尿素的检出。用乙醇制备的样品应尽快检测，或加盖密闭低温放置，以免乙醇挥发影响测定结果。本文所建立的复方白及乳膏的质量控制方法，专属性强，结果重现性好休闲农业论文，适用于该制剂的质量控制。对进一步完善报批注册提供了重要的文献支撑。
作者：常明泉 杨光义 黄良永 曹源源 单位：湖北医药学院附属太和医院
