铜与许多纤维化疾病都有着密切关系,口腔黏膜下纤维化(Oralsubmucousfibrosis,OSF)是一种慢性、隐匿性、具有癌变可能的炎性疾病，与咀嚼槟榔习惯有明显的关系[1，2]。本研究采用原子吸收光谱法(火焰法)[3-5]检测不同品牌的槟榔果中铜的含量，寻找到槟榔中铜的测定方法；再经过不同的处理方法处理槟榔果，检测铜的含量，力求寻找到一种能够有效降低槟榔中铜含量的方法，从而降低咀嚼槟榔对口腔黏膜的损伤。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
AA(240FS+240Z)原子吸收光谱仪(美国瓦里安公司Varian)。铜元素贮备液:C=1000μg/ml(天津市光复精细化工研究所),用时用0.5%硝酸逐级稀释至所需标准使用液。试验所用试剂为分析纯,所用玻璃仪器均以硝酸(10%)浸泡24h以上,最后用水洗净晾干。实验用水为去离子水。
1.2实验方法
(1)取不同品牌的槟榔果沿纵轴剖开后置80℃烤箱中烘烤至恒重，用中药药碾将烤干的槟榔碾碎成粉末状，称取5g待测，每组重复20次。(2)取干燥槟榔果若干，分别浸入不同溶液中处理，蒸馏水浸泡组、盐酸(hydrochloricacid，HCl)(0.1%)、HCl(0.5%)、HCl(1.0%)，EDTA-Na2(0.01mol/L)、EDTA-Na2(0.05mol/L)、EDTA-Na2(0.1mol/L)，每组分为两个时间组，时间分别为24、48h，处理后的槟榔置80℃烤箱中烘烤至恒重，用中药药碾将烤干的槟榔碾碎成粉末状，称取5g待测，每组重复20次。(3)铜含量的测定：将5g待测样品放入50ml锥形瓶中,加入25ml混合酸(硝酸∶高氯酸=4∶1),加盖浸泡过夜,置电热板上消化,至低温冒白烟,使样品溶解为湿盐状态(切勿蒸干),以HNO3定容至10ml,同样做试剂空白试验。将样品和空白稀释10倍后待测。在仪器工作条件下,对处理好的样品进行测定,由该元素的校准曲线计算铜的含量。(4)统计学分析数据用(x±s)表示。均数比较采用单因素方基金项目:江西省卫生计生委课题项目(编号：20151007)作者简介：蔺琳，女，1979年7月出生，硕士学位，主治医师，研究方向：口腔临床内科专业，包括口腔黏膜病的诊治。差分析。采用SPSS18.0统计软件分析完成,P<0.05为差异有统计学意义。
2讨论
铜与许多纤维化疾病都有着密切关系，例如Wilson’s肝纤维化、硬皮病肺纤维化、心肌纤维化等[6，7]。据报道，槟榔果中铜含量明显高于其他咀嚼果类[8-10]；咀嚼槟榔后5~30min后口腔全唾液中可溶性铜的含量明显升高，并且OSF病变组织中铜含量较正常黏膜者高[11]；有学者在体外培养的成纤维细胞中加入CuCl2发现胶原合成增加[12-14]，因此认为槟榔中富含铜是OSF致病因素之一。我国湖南、湖北和江西等省的一些民众喜嚼加工过的干槟榔，这几个地方也是OSF的高发地区[15]。在不同的地区不同的槟榔生产厂家，加工槟榔的方法有所不同，从树上摘下槟榔后有的仅经简单处理，如青果、烟熏果，有的则经过较为复杂的加工流程，会加入不同的添加成分如桂枝油、蜂蜜、芝麻等。本研究检测了各种品牌槟榔中铜的含量，发现各种品牌槟榔中都含有一定量的铜，其中青果及烟熏果中铜的含量较其他品牌为高，这表明在经过现有加工工艺加工后，能在一定程度上降低铜离子的含量，从而减少对黏膜的刺激和损伤。但从现有的槟榔咀嚼人群OSF发病率来看，还需设法进一步降低槟榔中铜离子的含量。如何尽量减少铜离子的含量，对于预防槟榔咀嚼人群OSF的发生、降低其发病率、保护该人群的口腔健康有重要的意义。
本研究尝试用不同浓度HCl和EDTA-Na2处理槟榔不同时间，结果显示除低浓度的HCl(0.1%24h)和EDTA-Na2(0.01mol/L24h)组外，其余各组均能有效地降低槟榔中铜离子的含量，其中HCl(1.0%24h)、HCl(1.0%48h)组的效果最显著，但这两组差别无显著性。这表明在槟榔加工过程中可以通过用一定浓度的HCl处理加工，特别是1.0%HCl处理槟榔，可降低成品槟榔的铜含量，从而降低咀嚼槟榔对口腔黏膜的损伤，这不仅能够造福人民群众，使槟榔咀嚼人群OSF发病率降低，同时亦可使槟榔加工企业获得可持续发展,但本研究尚属于实验室研究阶段，如需应用于槟榔加工工艺中还需进一步研究。
作者：蔺琳 程丽红 章佩 单位：江西省人民医院
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