１资料与方法
１．１临床资料
选取２０１３年１－１２月长兴县人民医院门诊及住院部收治的１２４例５岁以下腹泻患儿，其中男性７１例，女性５３例；１岁以下６８例，１～５岁５６例。收集患者的粪便和血液标本，临床指标在收集后１ｈ内完成检测。
１．２血液检测
Ｃ－反应蛋白（ＣＲＰ）检测采用免疫比浊法，在西门子ＤｉｍｅｎｓｉｏｎＲｘＬＭａ全自动生化分析仪上进行；血液中白细胞（ＷＢＣ）、中性粒细胞百分比（Ｎ）和淋巴细胞百分比（Ｌ）等血常规项目测定由迈瑞ＢＣ－５５００全自动五分类血液细胞分析仪完成。
１．３粪便常规检测
观察粪便外型，进行粪便性状黄糊软或水样归类。进行粪便隐血试验同时检测粪便中红细胞（ＲＢＣ）、ＷＢＣ、脂肪球。
１．４病毒检测
免疫金层析技术检测粪便标本的Ａ组轮状病毒（ＲＶｓ），试剂盒购自广州市宜康生物科技有限公司。实时荧光定量ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）（ＴａＫａＲａ）检测轮状病毒、星状病毒（ＡＳＴｓ）、腺病毒（ＨＡＤＶｓ）及诺如病毒（ＮＯＶｓ）的表达水平。按试剂盒说明书提取ＲＴ－ＰＣＲ所需模板。ｐｒｉｍｅｒ５．０软件设计ＰＣＲ引物，经ＢＬＡＳＴ验证后，委托南京金斯瑞生物科技有限公司合成，所用引物序列见表１。按试剂盒说明书在ＡＢＩ７９００上进行ＲＴ－ＰＣＲ，反应程序为：９４℃２ｍｉｎ；９４℃１５ｓ，６０℃４５ｓ扩增４０个循环。ＲＴ－ＰＣＲ阳性值判断标准严格按照试剂说明书判定。１．５统计分析采用ＳＰＳＳ１６．０统计软件进行统计分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２结果
２．１病毒检出率
１２４例腹泻患儿粪便标本，免疫金层析技术检测ＲＶｓ阳性率为３７．９％。ＲＴ－ＰＣＲ检测ＲＶｓ、ＡＳＴｓ、ＨＡＤＶｓ及ＮＯＶｓ阳性率为分别为４６．０％、４１．１０％、１９．４０％和１５．３２％。ＲＴ－ＰＣＲ检测粪便中ＲＶｓ灵敏度高于免疫金层析技术。
２．２胃肠功能紊乱及急性胃肠炎与临床参数的关系
１２４例腹泻患儿中胃肠功能紊乱患儿５８例，急性胃肠炎患儿６６例，其中急性胃肠炎在＜１岁患儿发生率７１．２％，明显高于胃肠功能紊乱患儿的３６．２％（Ｐ＜０．０１）。水样便发生率３９．４％，也明显高于胃肠功能紊乱患儿的１７．２％（Ｐ＜０．０５）。胃肠功能紊乱患儿血液ＣＲＰ＞１０和ＷＢＣ＞１０×１０９比例分别为３７．９％和２４．１％均明显高于急性胃肠炎患儿的２１．２％和７．６％（Ｐ＜０．０５）；胃肠功能紊乱患儿粪便ＷＢＣ阳性率１７．２％，也明显高于急性胃肠炎患儿的４．５％（Ｐ＜０．０５）。其余指标胃肠功能紊乱患儿和急性胃肠炎无明显差异。
２．３病毒感染与腹泻相关临床参数的关系
急性胃肠炎患儿各病毒感染率明显高于胃肠功能紊乱患儿（Ｐ＜０．０１）；＜１岁患儿病毒感染率明显高于≥１岁患儿（Ｐ＜０．０１）。ＲＶｓ、ＡＳＴｓ或ＨＡＤＶｓ感染患儿水样状粪便比例明显多于黄糊软状粪便（Ｐ＜０．０５）。ＨＡＤＶｓ感染患儿血液中Ｎ（％）明显高于非此病毒感染患儿（Ｐ＜０．０５）。ＮＯＶｓ感染者血液ＣＲＰ＞１０明显少见（Ｐ＜０．０５）。不同病毒感染与婴幼儿腹泻相关其余临床参数包括患儿性别、血液ＷＢＣ＞１０×１０９／Ｌ人数，粪便ＲＢＣ、ＷＢＣ、脂肪球和隐血的检出率等均无明显相关性。
２．４病毒重叠感染与腹泻相关临床参数的关系
同时感染两种（双重）或３种（三重）病毒的重叠感染占７３．４％，其中ＲＶｓ参与的重叠感染６５例。ＲＶｓ参与的双重感染急性胃肠炎发生率明显高于胃肠功能紊乱者（Ｐ＜０．０１）；ＲＶｓ参与的双重和三重感染在＜１岁患儿发生率高于其他年龄组（Ｐ＜０．０１），同时血液中Ｎ（％）明显高于非重叠感染患儿（Ｐ＜０．０５），粪便水样性状比黄糊软性状更易出现（Ｐ＜０．０５）。
３讨论
婴幼儿腹泻是一组多病原多因素引起的消化道疾病，病毒感染是引起５岁以下婴幼儿急性胃肠炎的主要原因之一。病毒侵入机体后，病毒在胞浆内增殖，受损细胞可脱落至肠腔而释放大量病毒，并随粪便排出，因此可以检测粪便中病毒明确病毒的类型。患儿最主要的症状是腹泻，排便数增多，出现水样便、黏液便或脓血便等。病毒增殖会影响细胞相关功能，导致钠和葡萄糖的吸收障碍，严重时可导致脱水和电解质平衡紊乱，如不及时治疗，可能危及生命。确定感染原因是采取合理治疗的前提，目前我国常用免疫金层析技术检测粪便轮状病毒抗原，本研究发现与免疫金层析技术相比，ＲＴ－ＰＣＲ能提高轮状病毒检测灵敏度。１２４腹泻患儿ＲＶｓ感染最常见为３７．９％，其次为ＡＳＴｓ。此结果与国内有些地区［１］及国外［３－４］部分报道有差异。提示在婴幼儿急性胃肠炎腹泻常规治疗中应考虑腹泻患儿感染优势病毒分布存在地域差异。本研究中１２４例患儿中７３．４％存在病毒重叠感染，ＲＶｓ重叠其他病毒感染６５例，其中以重叠ＡＳＴｓ最常见，占９．１％，与国外报道ＲＶｓ与ＨＡＤＶｓ重叠感染最常见也有差异［５］。比较腹泻患儿的临床指标发现，病毒性感染后急性胃肠炎比胃肠功能紊乱更常见且在＜１材料管理论文岁婴幼儿中更易发生，可能与患儿肠道免疫屏障尚未成熟有关。
作者：施前锋 潘新娣 王叶萍 邵伟芳 钱娇赟 孙爱华 单位：浙江省长兴县人民医院检验科 浙江医学高等专科学校微生物教研室
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