柴胡为２０１０版《中国药典》一部收录的解表类中药，药用部位为伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根，前者习称“北柴胡”，后者习称“南柴胡”，主产于东北、华北、西北及山东、河南、湖南、江苏、四川等地。味苦、辛，性微寒。归肝、胆经。功效解表退热、截疟、疏肝解郁、升举阳气。临床用名有柴胡、醋柴胡、酒柴胡、鳖血柴胡。柴胡中主要含有皂苷类、挥发油类、黄酮类、多糖类成分［１－２］，柴胡挥发油具有镇痛、解热、抗炎等作用［３］。前期研究报道采用超临界ＣＯ２萃取法提取柴胡挥发油效率较高，但该法提取的成分与传统提取方法差异较大［２］。本文应用水蒸气蒸馏法、蒸馏法、溶剂提取法提取柴胡挥发油，并进行ＧＣ－ＭＳ分析，比较不同提取方法所得挥发油的成分差异，结合其传统功效，找出可能的主要有效成分，为后续的药效学研究提供一定的实验基础。
１材料
柴胡饮片（安徽亳州浙皖中药饮片有限公司，批号：１３０７０１），经鉴定为伞形科植物柴胡的干燥根；Ａｇｉｌｅｎｔ６８９０／５９７５Ｂ型ＧＣ－ＭＳ仪，７６８３Ｂ型自动进样器。标准谱库为ＮＩＳＴ０５数据库；百万分之一分析天平（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ，德国），旋转蒸发器（ＲＥ－５２Ａ，上海亚荣），其他试剂均为分析纯，购自无锡亚盛化工有限公司。
２方法
２．１挥发油提取方法
２．１．１水蒸气蒸馏法（Ａ法）称取１５０ｇ柴胡细粉，５倍量蒸馏水浸泡，使用挥发油提取器提取３ｈ，静置０．５ｈ，收集挥发油用乙醚溶解，无水硫酸钠除水，挥干乙醚后称质量，平行操作３次，计算平均得率。挥发油得率＝挥发油质量／柴胡饮片原料质量×１００％。２．１．２酸水蒸气蒸馏法（Ｂ法）称取１５０ｇ柴胡细粉，用５倍量２０％ＮａＣｌ，ｐＨ＝１（硫酸调）的酸水浸泡过夜，使用挥发油提取器提取３ｈ，静置０．５ｈ，收集挥发油，用乙醚溶解，无水硫酸钠除水，挥干乙醚后称质量，平行操作３次，计算平均得率。２．１．３水蒸馏法（Ｃ法）称取１５０ｇ柴胡细粉，用５倍量蒸馏水浸泡，进行蒸馏，收集初馏液１０００ｍＬ，将初馏液再次蒸馏，收集精馏液５００ｍＬ，用等量乙醚萃取２次，合并乙醚液，回收乙醚后称质量，平行操作３次，计算平均得率。２．１．４酸水蒸馏法（Ｄ法）称取１５０ｇ柴胡细粉，用５倍量２０％ＮａＣｌ，ｐＨ＝１（硫酸调）的酸水浸泡，进行蒸馏，收集初馏液１０００ｍＬ，将初馏液再次蒸馏，收集精馏液５００ｍＬ，用等量乙醚萃取２次，合并乙醚液，回收乙醚后称质量，平行操作３次，计算平均得率。２．１．５溶剂提取法（Ｅ法）称取１５０ｇ柴胡细粉，加５倍量石油醚，６０℃回流提取３ｈ，过滤得石油醚提取液，４５℃旋转蒸发挥干石油醚，收集挥发油并称质量，平行操作３次，计算平均得率。
２．２ＧＣ－ＭＳ分析
２．２．１ＧＣ－ＭＳ样品的制备精密称取各提取方法所得的挥发油适量，用乙酸乙酯配制成浓度为１％的溶液，进行ＧＣ－ＭＳ分析，进样量为１μＬ。２．２．２ＧＣ条件色谱柱ＤＢ－１型（３０．０ｍ×０．２５ｍｍ，膜厚０．２５μｍ）；程序升温：６０℃４ｍｉｎ→５℃／ｍｉｎ→１７０℃４ｍｉｎ→５℃／ｍｉｎ→２５０℃５ｍｉｎ；进样口温度为２４０℃；分流比为１０∶１，载气为氮气，流速为１ｍＬ／ｍｉｎ。２．２．３ＭＳ条件ＥＩ离子源；离子能量７０ｅＶ；扫描范围３０～５００ａｍｕ；离子源温度２３０℃；信号采集时间为５０ｍｉｎ。
３结果与讨论
３．１不同提取方法的得油率
不同提取方法的挥发油得油率见表１，在所考察的提取方法中，Ｅ法的得油率最高，但含较多的杂质。Ｂ法和Ｄ法用２０％ＮａＣｌ，ｐＨ＝１（硫酸调）的酸水浸泡处理柴胡饮片后，得油率比相应的Ａ法和Ｃ法的得油率要低一些。Ｂ法和Ｄ法得到的挥发油颜色偏棕红色，而Ａ法和Ｃ法得到的挥发油颜色偏淡黄色。
３．２不同提取方法的挥发油成分
ＧＣ－ＭＳ分析不同提取方法的挥发油进行ＧＣ－ＭＳ分析，总离子流色谱图见图１。每个组分的质谱图由计算机检索并与ＮＩＳＴ０５标准数据库对照，鉴定出分子结构。不同提取方法的挥发油化学成分及利用归一化法计算的相对含量见表２。由表２可见，经ＧＣ－ＭＳ检测，不同提取方法的挥发油中含量大于１％的成分分别有１４（Ａ法）、２３（Ｂ法）、２５（Ｃ法）、３１（Ｄ法）及１２（Ｅ法）个。其中Ｂ法提取的挥发油中抗炎有效成分己酸的含量最高，提示药典提取方法的合理性。水蒸气蒸馏法是最常用的挥发油连续动态提取法，具有操作简便、效率较高等优点，在中药的研制与生产中应用广泛。水蒸馏法可以得到一些与水易混溶的挥发油成分。Ｂ法及Ｄ法中采用酸水处理，可以提高一些酸性挥发油成分的提取得率。溶剂提取法得到的挥发油中含有的树脂、油脂类等杂质较多。不同种不同提取方法的挥发油化学成分相对含量最高的为茴香脑，依次为８９．４４％（Ａ法）、８５．６２％（Ｂ法）、８０．２４％（Ｃ法）、５９．１４％（Ｄ法）及７５．８５％（Ｅ法）；其次为茴香脑的同分异构体蒿脑，含量分别为５．１４％（Ａ法）、４．４７％（Ｂ法）、６．１７％（Ｃ法）、４．４９％（Ｄ法）及４．６３％（Ｅ法）；其中反式－２－壬烯醛、松油醇为酸处理后提取特有的成分。以上成分与以往报道的柴胡挥发性成分［２］差别较大，茴香脑有明显的升高白细胞，抗炎镇痛作用［４］，与柴胡挥发油的整体药效一致。本实验首次发现柴胡挥发油主要成分为茴香脑及其同分异构体蒿脑，其在解热方面的药效及在不同产地，不同采收期的柴胡挥发油中的含量还需进一步进行研究。
作者：施铮 陈仁寿 陈勇 单位：南京中医药大学中医药文献研究所
