１材料与方法
１．１药品与试剂
芦丁（Ｒｕｔｉｎ，纯度≥９８％）：Ｓｉｇｍａ公司，美国；碳酸氢钠（ＮａＨＣＯ３）：上海生工生物；磷酸二氢钠（ＮａＨ２ＰＯ４）：上海生工生物；分析纯氯化镁（ＭａｇｎｅｓｉｕｍＣｈｌｏｒｉｄｅ，ＭｇＣｌ２）：天津化学试剂一厂；分析纯氯化钙（ＣａｌｃｉｕｍＣｈｌｏｒｉｄｅ，ＣａＣｌ２）：天津化学试剂三厂；分析纯葡萄糖（Ｇｌｕｃｏｓｅ）：天津市大茂化学试剂厂；分析纯氯化钠（ＳｏｄｉｕｍＣｈｌｏｒｉｄｅ，ＮａＣｌ）：天津市北辰方正试剂厂；分析纯氯化钾（ＰｏｔａｓｓｉｕｍＣｈｌｏｒｉｄｅ，ＫＣｌ）：天津市北辰方正试剂厂。
１．２实验动物
成年雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｒ（ＳＤ）大鼠（２００ｇ～２１０ｇ），购自山西医科大学实验动物中心，每６只一笼，自由摄食和饮水。动物用戊巴比妥钠经腹腔注射麻醉后，取其心脏用于Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ实验。
１．３制备离体心脏灌流模型
大鼠麻醉后，立即开胸取出其心脏，置于９５％Ｏ２＋５％ＣＯ２混合气体饱和的４℃台式液中（具体成分：ＮａＣｌ１３６．８９ｍｍｏｌ／Ｌ，ＮａＨ２ＰＯ４０．４２ｍｍｏｌ／Ｌ，ＮａＨＣＯ３１１．９０ｍｍｏｌ／Ｌ，ＭｇＣｌ２０．４９ｍｍｏｌ／Ｌ，ＫＣｌ２．６８ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｇｌｕｃｏｓｅ６．１２ｍｍｏｌ／Ｌ，ＣａＣｌ２１．８０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ＝７．４），轻轻挤压心脏以排净残留的血液，心脏暂时停跳。经主动脉逆行插管，将心脏固定于Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ插管上，插管不能太深，以免造成灌流不畅［４－６］。用台式液对大鼠离体心脏进行持续恒温（３７℃）、恒压［８０ｃｍＨ２Ｏ（１ｃｍＨ２Ｏ＝０．０９８ｋＰａ）］灌流，灌流液持续以９５％Ｏ２＋５％ＣＯ２混合气体饱和。灌流几分钟后，心脏即可恢复跳动。剪开肺动脉口，收集其１ｍｉｎ内的冠脉流出液即为冠脉流量。在左心房处剪一小切口，将一乳胶球囊经该切口插入左心室，用水向球囊内注入一定压力，使得左心室舒张压维持在１０ｍｍＨｇ左右［７］，用腰麻管将囊内压力连接至压力传感器，其他各项血流动力学参数通过ＢＬ－４２０Ｅ生物信号采集分析系统记录。
１．４离体大鼠心脏冠脉流量及血流动力学参数的记录
将心脏固定好后，稳定约３０ｍｉｎ，开始实验，记录给予正常台式液时心脏冠脉流量及血流动力学参数左心室收缩压（ｌｅｆｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｄｅｖｅｌｏｐｅｄｐｒｅｓｓｕｒｅ，ＬＶＤＰ）、左心室舒张压（ｌｅｆｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｄｉａｓｔｏｌｉｃｐｒｅｓ－ｓｕｒｅ，ＬＶＥＤＰ）、左心室内压最大上升速率（＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ）和左心室内压最大下降速率（－ｄｐ／ｄｔｍａｘ）的数值，待正常指标稳定且记录后，用含有不同浓度芦丁（０．３μｍｏｌ／Ｌ，１μｍｏｌ／Ｌ，３μｍｏｌ／Ｌ，１０μｍｏｌ／Ｌ，３０μｍｏｌ／Ｌ）或溶剂的台式液灌流心脏，观察各参数的变化。
１．５统计学处理采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件进行分析，数据以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，采用ｔ检验，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２结果
２．１不同浓度芦丁对离体大鼠心脏ＣＦ的影响用正常台式液灌流离体大鼠心脏时，冠脉流量为７．３ｍＬ／ｍｉｎ±１．２ｍＬ／ｍｉｎ，用含不同浓度芦丁的台式液灌流后，冠脉流量发生浓度依赖性增大，最大值为１２．６ｍＬ／ｍｉｎ±１．１ｍＬ／ｍｉｎ。
２．２不同浓度芦丁对离体大鼠心脏ＬＶＤＰ和＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ的影响用正常台式液灌流时，大鼠离体心脏ＬＶＤＰ和＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ的基础值分别为６０ｍｍＨｇ±２ｍｍＨｇ和１１３５ｍｍＨｇ／ｓ±１０２ｍｍＨｇ／ｓ。芦丁可浓度依赖性增大ＬＶＤＰ值和＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ值，最大值分别为７３ｍｍ－Ｈｇ±４ｍｍＨｇ和１４２７ｍｍＨｇ／ｓ±１１５ｍｍＨｇ／ｓ。
２．３不同浓度芦丁对离体大鼠心脏ＬＶＥＤＰ和－ｄｐ／ｄｔｍａｘ的影响正常台式液灌流时，离体大鼠心脏ＬＶＥＤＰ和－ｄｐ／ｄｔｍａｘ的基础值分别为１１ｍｍＨｇ±２ｍｍＨｇ和１０２１ｍｍＨｇ／ｓ±１０３ｍｍＨｇ／ｓ，改用含不同浓度的芦丁灌流时，均没有对ＬＶＥＤＰ值和－ｄｐ／ｄｔｍａｘ值产生显著影响。
３讨论
冠脉流量可以一定程度上反映冠状动脉的收缩或舒张情况。本实验结果显示，芦丁可浓度依赖性的增加大鼠离体心脏的冠脉流量，使其冠脉流量值从７．３ｍＬ／ｍｉｎ±１．２ｍＬ／ｍｉｎ增加到１２．６ｍＬ／ｍｉｎ±１．１ｍＬ／ｍｉｎ。ＬＶＤＰ和＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ反映左室收缩功能。ＬＶＤＰ表示左心室收缩末期的心室内压；＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ表示等容收缩期左室内压最大上升速率。本实验结果显示，芦丁能够浓度依赖性增加大鼠离体心脏的ＬＶＤＰ和－ｄｐ／ｄｔｍａｘ，使ＬＶＤＰ值从６０ｍｍＨｇ±２ｍｍＨｇ增大到７３ｍｍＨｇ±４ｍｍＨｇ，使－ｄｐ／ｄｔｍａｘ值从１１３５ｍｍＨｇ／ｓ±１０２ｍｍＨｇ／ｓ增大到１４２７ｍｍＨｇ／ｓ±１１５ｍｍＨｇ／ｓ。ＬＶＥＤＰ和－ｄｐ／ｄｔｍａｘ反映左心室舒张功能。ＬＶＥＤＰ表示左心室舒张末期的心室内压；－ｄｐ／ｄｔｍａｘ表示等容舒张期左室内压最大下降速率。本实验结果显示，芦丁对大鼠离体心脏的ＬＶＥＤＰ和－ｄｐ／ｄｔｍａｘ值不产生显著影响。已有研究表明，芦丁可通过降低缺血再灌注损伤过程中的过氧化反应而保护心肌［３］。本研究中，从芦丁对ＣＦ、ＬＶＤＰ和＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ影响可以得出，芦丁对大鼠离体心脏有一定的正性肌力作用。本实验采用离体心脏灌流的实验方法，观察了芦丁对大鼠心脏冠脉流量和血流动力学参数的影响。今后将从整理水平和细胞水平，观察芦丁对大鼠心脏的作用，以进一步阐明其对心脏的作用机制。
作者：李锋 单位：山西医科大学第一医院
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