乳腺癌为恶性肿瘤，在临床中常见。近年来随着人们生活习惯的改变，乳腺癌发病率逐渐上升，而临床却无法有效控制其病死率［１］。对于乳腺癌患者而言，转移是导致其病死的主要原因。肿瘤转移过程极其复杂，与生物学有关，当前使用常规病理学无法准确评估不同患者肿瘤转移潜能以及预后［２］。而经大量研究后发现ＨＥＲ－２基因密切关联于乳腺癌患者的治疗方案，例如化疗、内分泌、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ、预后等方案的选择［３］。本文为探讨使用荧光原位杂交技术检测乳腺原发癌和淋巴结转移癌ＨＥＲ－２基因的表达及意义，现选取患者４０例作为研究对象，回顾性分析其临床资料，并报道如下。
１资料与方法
１．１一般资料
选取海口市人民医院２０１３年１月至２０１４年１月收治的乳腺原发癌患者４０例作为研究对象，收集所有患者的手术切除标本，应用荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ）与免疫组织化学技术（ＩＨＣ）对所有患者手术切除标本的ＨＥＲ－２基因表达予以检测。４０例患者年龄３１～７９岁，平均（５６．３±４．７）岁；３８例为浸润性导管癌，浸润性小叶癌与浸润性导管－小叶癌各为１例。使用１０％中性福尔马林对所有标本予以固定，并使用常规石蜡进行包埋处理。
１．２方法
ＦＩＳＨ检测法：组织切片每片为２μｍ，将其放置于载玻片上，之前已使用Ｌ－多聚赖氨酸对载玻片予以处理，而后放置于６５℃环境下烘烤，过夜后按照试剂盒说明书严格规范试验操作。ＦＩＳＨ试剂盒产自北京金菩嘉。ＩＨＣ检测法：组织切片每片为４μｍ，将其放置于载玻片上，之前已使用Ｌ－多聚赖氨酸对载玻片予以处理，而后放置于６５℃环境下烘烤，时间持续１ｈ，而后按照试剂盒标准严格规范操作，该试剂盒产自福州迈新。质量控制：载玻片经多聚赖氨酸处理后，设置不同的ＤＮＡ样品区，将不同ＤＮＡ样品溶液分别加到其上，风干后紫外交联仪照射，使ＤＮＡ结合到玻片上，得到简化的染色体片，而后进行免疫检测，通过不同区域信号的反应得出荧光原位杂交质量反馈。采用本监控方法，可以快速地锁定杂交过程中出现问题的中间环节，并进行相应的纠正，从而快速高效地应用ＦＩＳＨ技术。
１．３结果判定标准
ＦＩＳＨ：对３０个细胞核予以计数，对Ｒａ－ｔｉｏ（细胞核中红信号总数与率信号总数的比值）予以统计，若Ｒａｔｉｏ在１．８以下则为阴性，说明该样本中不存在ＨＥＲ－２基因扩增现象；若在２．２以上则为阳性，说明该样本中存在ＨＥＲ－２基因扩增现象；若Ｒａｔｉ在１．８～２．２，则可计数１００个细胞核，或者再次开展ＦＩＳＨ检测对最终结果予以判断。ＩＨＣ：若癌细胞出现棕褐色则代表为阳性，结合染色强度对阳性程度予以划分，主要有弱阳性（＋）：１０％以上的肿瘤细胞有不完整且微弱的细胞膜着色；中度阳性（＋＋）：１０％以上的肿瘤细胞有完整且弱或者中度的细胞膜着色；强阳性（＋＋＋）：１０％以上的肿瘤细胞有完整且强的细胞膜着色。
１．４统计学处理
应用ＳＰＳＳ２２．０对全部数据予以统计学处理，对比以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２结果
２．１两种检测方法的ＨＥＲ－２基因表达对比
ＦＩＳＨ检测后阳性１７例（４２．５％），ＩＨＣ阳性２３例（５７．５％）。两者符合率如表１所示。
２．２ＨＥＲ－２基因表达与淋巴结转移的关系
淋巴结转移与淋巴结未转移阳性率对比，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见表２。
３讨论
ＨＥＲ－２基因存在于人体１７ｑ２１，１８５×１０３跨膜糖蛋白为其编码分子，属于原癌基因。一般而言ＨＥＲ－２基因不会诱发肿瘤，其自身有诸多Ｔｙｒ（酪氨酸残基）磷酸化位点，在受体分子膜区亦存在ＰＴＫ（酪氨酸蛋白激酶）活性［４－５］。当生长因子结合于ＨＥＲ－１、３或者４后，会引发蛋白膜外区构象产生变化，结合于ＨＥＲ－２生成异二聚体，增加细胞膜内的ＰＴＫ活性，致使Ｔｙｒ自身出现磷酸化。存在于ＨＥＲ－２蛋白膜内段的磷酸化位点为识别ＰＴＫ底物的位点，可对特定信号蛋白产生作用［６－７］。因此，Ｔｙｒ是否出现磷酸化对于下游底物分子的解离与结合状态有决定作用，可对信号转导予以调节。一旦失控会持续开启增殖信号途径，进而诱发肿瘤。ＨＥＲ－２指标不仅密切关联于肿瘤发展，同时还可作为预后指标［８－１０］。当前诊断ＨＥＲ－２基因主要有ＩＨＣ与ＦＩＳＨ法，前者操作简易，重复性好，且成本低，敏感性较强，故而使用广泛，但是会致使抗原决定簇丢失，且经标准化固定后会改变抗原进而降低其敏感性，会导致检测结果出现假阳性或者假阴性，对其精确性存在影响［１１］。ＦＩＳＨ主要是对ＤＮＡ予以检测，具有较高的可重复性、特异性以及稳定性，且不会受到主观因素的影响，客观性较强，因此世界卫生组织将其作为金标准［１２］。在本研究中，使用ＩＨＣ与ＦＩＳＨ法对乳腺原发癌与淋巴结转移癌ＨＥＲ－２基因表达予以检测后发现ＦＩＳＨ阳性率为４２．５％，ＩＨＣ为５７．５％；ＩＨＣ阴性时与ＦＩＳＨ符合率为８８．２％，ＩＨＣ（＋）与ＦＩＳＨ符合率为３７．５％，ＩＨＣ（＋＋）与ＦＩＳＨ符合率为８３．３％，ＩＨＣ（＋＋＋）与ＦＩＳＨ符合率为１００．０％。淋巴结转移阳性率为６６．６７％，未转移阳性率为３２．１４％，对比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。与宋宝等［１３］的研究结果相近。综上所述，ＩＨＣ对ＨＥＲ－２基因予以检测时若结果为阴性或者宏观经济论文强阳性则与ＦＩＳＨ符合率较高，同时ＨＥＲ－２基因表达与腋淋巴结转移之间呈正相关关系。
作者：钟威达 单位：海南省海口市人民医院检验科 海南妇产科医院检验科
