1仪器与材料
日本岛津液相色谱仪由LC-20Ap输液泵,SPD-20AP检测器和CBM-20A工作组成;BrukerAVAIVCEⅢ-500型核磁共振谱仪(布鲁克公司);氘代试剂为CambridgeIsotopeLaboratories,InC;色谱柱为EZ0566;HH-S26S型水浴锅(金坛市大地自动化仪器厂);RE52-2型旋转蒸发器(上海泸西分析仪器厂);KQ-100型系列超声波冲洗器(昆山市超声仪器有限公司);硅胶(青岛海洋化工厂);Seph-adexLH-20(Pharmacia);柱色谱试剂均为分析纯。实验用白益母草于2013年采集自内蒙古鄂尔多斯,由内蒙古民族大学蒙医药学院蒙药生药学教研室主任布和巴特尔教授鉴定为唇形科植物白龙昌菜PanzeriaalashanicaKuprian的地上部分,标本(编号:20140626)保存于内蒙古民族大学蒙医药学院蒙药化学教研室。
2提取与分离
干燥白益母草1000g,依次用氯仿、乙酸乙酯和丙酮各5L,回流提取2次,每次4h,滤过。滤液减压回收溶剂,分别得到氯仿提取物约50g、乙酸乙酯提取物20g和丙酮提取物50g。乙酸乙酯提取物20g,加少量硅胶(200~300目)拌样后,充分干燥,采用硅胶柱层析分离,氯仿-丙酮溶剂系统梯度洗脱,流分经薄层检测合并为8个流分Fr.1~8。Fr.3(80mg)拌样后,采用硅胶柱层析,用氯仿-丙酮(50∶1)洗脱,依次得化合物1(12mg)和2(12mg);Fr.4(100mg)用氯仿-丙酮(40∶1)洗脱,依次得化合物3(10mg)、4(21mg)和化5(9mg);Fr.5(30mg)加甲醇溶解,采用SephadexLH-20柱,以甲醇为洗脱液,依次得化合物6(10mg)和7(9mg)。Fr.7(850mg),拌样,采用硅胶柱层析,用氯仿-甲醇溶剂系统梯度洗脱,流分经薄层检测合并为3个流会Fr.7-1~7-3。Fr.7-22加甲醇溶解,采用SephadexLH-20柱,以甲醇为洗脱液,分离纯化得化合物8(22mg),同时母液经反相ODS柱色谱,乙腈-水(31∶69)洗脱,得化合物9(18mg)。
3结构鉴定
化合物1:无色针晶(氯仿),紫外灯254mm下显蓝色荧光,易溶于氯仿。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:7.61(1H,d,J=9.5Hz,H-4),7.37(1H,d,J=8.5Hz,H-5),6.85(1H,d,J=8.5Hz,H-6),6.81(1H,s,H-8),6.29(1H,d,J=9.5Hz,H-3);13C-NMR(500MHz,CDCl3)δ:160.5(C-2),112.0(C-3),145.1(C-4),128.9(C-5),113.0(C-6),161.2(C-7),101.6(C-8),156.1(C-9),110.2(C-10)。以上数据与文献〔4〕报道对照基本一致,故确定该化合物为7-甲氧基香豆素。
化合物2:黄色针晶(氯仿),易溶于甲醇。盐酸-镁粉反应呈阳性。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.6(1H,s,5-OH),7.97(1H,d,J=2.0Hz,H-2'),7.53(1H,dd,J=8.5,2.0Hz,H-6'),6.95(1H,d,J=8.5Hz,H-5'),6.42(1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.23(1H,d,J=2.0Hz,H-6),3.86(3H,s,-OCH3);13C-NMR(125MHz,DMSO-d6)δ:157.2(C-2),133.6(C-3),177.5(C-4),157.4(C-5),99.1(C-6),164.7(C-7),94.5(C-8),161.5(C-9),105.4(C-10),121.1(C-1'),113.7(C-2'),147.8(C-3'),149.8(C-4'),115.8(C-5'),122.3(C-6'),55.7(3'-OCH3)。以上数据与文献〔5〕报道对照基本一致,故确定该化合物为异鼠李素。
化合物3:淡黄色针晶(氯仿),易溶于氯仿。在紫外光灯(254nm)下有暗斑。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.6(1H,s,-COOH),7.41(1H,d,J=16.0Hz),7.01(1H,s),6.91(1H,d,J=8.5Hz),6.73(1H,d,J=8.5Hz),6.17(1H,d,J=16.0Hz)。以上数据与文献〔6〕报道对照基本一致,故确定该化合物为咖啡酸。
化合物4:黄色针晶(氯仿),易溶于甲醇。盐酸-镁粉反应呈阳性。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.6(1H,s,5-OH),7.91(1H,d,J=2.0Hz,H-2'),7.51(1H,dd,J=8.5,2.0Hz,H-6'),6.92(1H,d,J=8.5Hz,H-5'),6.62(1H,s,H-3),6.45(1H,d,J=2.0Hz,H-6),6.34(1H,d,J=2.0Hz,H-8),3.90(3H,s,-OCH3),3.88(3H,s,-OCH3),3.86(3H,s,-OCH3);13C-NMR(120MHz,DMSO-d6)δ:164.2(C-2),104.7(C-3),182.5(C-4),162.1(C-5),98.7(C-6),165.2(C-7),92.7(C-8),157.8(C-9),105.9(C-10),121.7(C-1'),113.2(C-2'),147.5(C-3'),149.4(C-4')、115.0(C-5'),122.7(C-6'),56.1(7-OCH3),55.9(3'-OCH3),55.5(4'-OCH3)。以上数据与文献〔7〕报道对照基本一致,故确定该化合物为5-羟基-7,3',4'-三甲氧基黄酮。
化合物5:1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.8(1H,s,5-OH),7.84(2H,d,J=8.0Hz,H-2',6'),7.01(2H,d,J=8.0Hz,H-3',5'),6.58(1H,s,H-3),6.48(1H,d,J=2.0Hz,H-6),6.36(1H,d,J=2.0Hz,H-8),3.89(3H,s,-OCH3),3.88(3H,s,-OCH3);13C-NMR(125MHz,DMSO-d6)δ:164.0(C-2),104.4(C-3),182.5(C-4),162.6(C-5),98.0(C-6),165.4(C-7),92.6(C-8),157.7(C-9),105.6(C-10),123.6(C-1'),128.1(C-2'),114.5(C-3'),162.2(C-4'),114.5(C-5'),128.1(C-6'),55.8(7-OCH3),55.5(4'-OCH3)。以上数据与文献〔3〕报道对照基本一致,故确定该化合物为5-羟基-7,4'-二甲氧基黄酮。
化合物6:1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.4(1H,s,5-OH),10.8(1H,s,7-OH),10.2(1H,s,4'-OH),9.45(1H,s,3-OH),8.01(2H,d,J=8.5Hz,H-2',6'),6.97(2H,d,J=8.5Hz,H-3'5'),6.45(1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.25(1H,d,J=2.0Hz,H-6);13C-NMR(125MHz,DMSO-d6)δ:156.9(C-2),135.1(C-3),177.1(C-4),160.4(C-5),98.1(C-6),163.7(C-7),93.5(C-8),156.4(C-9),103.1(C-10),121.8(C-1'),115.3(C-2',6'),128.1(C-3',5'),161.7(C-4')。以上数据与文献〔8〕报道对照基本一致,故确定该化合物为山柰酚。
化合物7:黄色粉末(甲醇),易溶于甲醇。盐酸-镁粉反应、Molish反应均呈阳性。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.6(1H,s,5-OH),7.96(1H,d,J=2.0Hz,H-2'),7.51(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6'),6.93(1H,d,J=8.0Hz,H-5'),6.46(1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.23(1H,d,J=2.0Hz,H-6);13C-NMR(125MHz,DMSO-d6)δ:156.8(C-2),133.4(C-3),177.9(C-4),161.7(C-5),99.1(C-6),164.7(C-7),94.2(C-8),156.9(C-9),104.5(C-10),121.5(C-1'),113.9(C-2'),147.3(C-3'),149.8(C-4'),115.6(C-5'),122.5(C-6'),101.2(C-1″),74.8(C-2″),76.9(C-3″),70.2(C-4″),77.9(C-5″),61.0(C-6″)。在HMBC谱中端基质子信号δ5.58(1H,d,J=7.0Hz)与δ133.4(C-3)相关,说明葡萄糖连接在异鼠李素3位。以上数据与文献〔9〕报道对照基本一致,故确定该化合物为异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物8:黄色粉末(甲醇),易溶于甲醇。盐酸-镁粉反应、Molish反应均呈阳性。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.6(1H,s,5-OH),8.07(2H,d,J=8.5Hz,H-2',6'),6.90(2H,d,J=8.5Hz,H-3',5'),6.45(1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.24(1H,d,J=2.0Hz,H-6);13C-NMR(125MHz,DMSO-d6)δ:156.7(C-2),133.6(C-3),177.8(C-4),161.5(C-5),99.3(C-6),164.4(C-7),94.7(C-8),160.1(C-9),104.4(C-10),121.3(C-1'),129.8(C-2',6'),115.5(C-3',5'),161.4(C-4'),101.5(C-1″),73.9(C-2″),76.7(C-3″),70.1(C-4″),77.0(C-5″),61.0(C-6″)。在HMBC谱中端基质子信号δ5.41(1H,d,J=7.5Hz)与133.6(C-3)相关,说明葡萄糖连接在山柰酚3位。以上数据与文献〔10〕报道对照基本一致,故确定该化合物为山柰酚-3-β-D-葡萄糖苷。
化合物9:黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉反应、Molish反应均成阳性。比较化合物9(表1)和7的1H-NMR、13C-NMR数据,发现该两个化合物的结构极为相似,所不同是化合物9中有两个糖部分。糖区一个葡萄糖的碳信号分别为:101.6(C-1″),74.7(C-2″),76.4(C-3″),70.6(C-4″),76.9(C-5″),67.3(C-6″)和一个鼠李糖的碳信号分别为:101.4(C-1‴),71.1(C-2‴),70.8(C-3‴),72.2(C-4‴),68.8(C-5‴),18.2(C-6‴),并且1H-NMR谱端基质子信号δ5.44(1H,d,J=7.5Hz)和5.14(1H,d,J=4.0Hz),分别显示为β,α糖苷键。在HMBC谱中δ5.44(1H,d,J=7.5Hz)与δ162.7(C-7)和δ5.14(1H,d,J=4.0Hz)与δ67.3(C-6″)分别相关,说明内源糖连接在3位而外源糖连接在内源糖6″位。在NOESY和COSY谱中进一步征实了该化合物的结区域经济期刊构式,故鉴定为异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖基-(1→6)-O-α-L-鼠李糖苷。
作者：邵彩云 单位：内蒙古民族大学蒙医药学院
相关专题：黑龙江中医药杂志投稿 中国经济网
