1材料与方法
1.1微生物发酵
以酱糟(30%)、木薯渣(10%)、玉米黄浆(30%)和玉米喷浆纤维(30%)食品工业废渣为发酵底物，添加乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌进行固态发酵。接种用乳酸菌冰干粉为西南民族大学生命科学与技术学院动物科学实验室从牦牛消化道中分离筛选的优良菌株———嗜酸乳杆菌LAg12－7，该菌株已送中国典型培养物保藏中心———武汉大学保藏中心保藏，其保藏编号为CCTCCM2012305;枯草芽孢杆菌和酵母菌干菌粉购于北京华辰兴业科技有限公司。将乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌的冻干粉按40.0%、30.0%和30.0%的比例制成混合发酵菌剂。取复合发酵菌剂1.0份，加红糖5.0、维生素C0.4、尿素3.1、磷酸二氢钾0.5和清洁水90.0份，30℃活化72h，制成混合发酵菌液。在发酵底物中按3%的比例加入活化后的混合发酵菌液。参考闫征等、王秋菊等和刘新星等方法，在30℃培养箱发酵5d。发酵期间适当补水，水分含量控制在30%左右，每24h翻动1次。发酵前1d和发酵后(第5天)的物料各取100g装于自封口塑料袋中，立即置于－20℃冰箱中保藏。以上微生物发酵饲料试验重复进行3次，即得3个批次的发酵饲料。
1.2样品处理
取适量发酵前和发酵后饲料鲜样－4℃保藏，用于活菌计数和pH测定。将发酵前和发酵后饲料样品置于90℃烘箱中烘30min以灭酶活，而后65℃烘6h，室温自然放置6h得到风干样品。将风干样品分2份粉碎，并过20目筛(用于纤维测定)和40目筛(用于粗蛋白和小肽测定)。
1.3指标测定
1.3.1活菌数的测定
乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌分别梯度培养计数，培养基的配制参考杨雪峰等和刘惠知等的方法，计数方法依照GB/T13093－2006。
1.3.2pH的测定
pH的测定方法参照王旭明并有所改进，对样品10倍稀释混匀后采用Beckman离心机8000r/min离心，取上清液测定。
1.3.3常规营养成分的测定
中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)采用VELP纤维素测定仪;粗蛋白(CP)采用FOSS蛋白测定仪。测定方法参照张丽英饲料中常规成分分析一章。
1.3.4蛋白酶和纤维素酶活性的测定
以40目风干样品为原料测定酶活力，蛋白酶活力的测定参考张寒俊等方法，纤维素酶活力的测定采用二硝基水杨酸法(DNS)法。
1.3.5小肽含量的测定
小肽含量的测定参照郭玉东等方法，并对其进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS－PAGE)，定性说明小肽含量变化。
1.4统计分析
对3批次发酵饲料分别采样并测定相应指标，试验结果用平均值±标准差表示，发酵前后的差异性采用SPSS18.0统计软件中的t检验。
2结果与方法
2.1活菌数及pH
发酵后食品工业废渣中3种有益菌活菌数均极显著提高(P＜0.01)，乳酸菌和酵母菌达到108数量级。与发酵前相比，乳酸菌数增加454.90%，枯草杆菌数增加282.35%，酵母菌数增加403.70%。发酵5d后，由于微生物尤其是乳酸菌的新陈代谢，导致食品工业废渣的pH明显下降，由5.80降至3.91，降幅达32.59%，P为0.0041。
2.2常规营养成分
发酵后食品工业废渣CP含量极显著增加(P＜0.01)，增幅达21.68%;NDF和ADF含量均显著下降(P＜0.05)，其中NDF下降10.61%，ADF下降9.23%。
2.3活性成分
发酵过程中由于微生物不断分泌代谢产物，使得食品工业废渣的蛋白酶和纤维素酶活力均提高2倍以上，蛋白酶活力增幅达138.45%，纤维素酶活力增幅达143.20%。小肽含量显著提高，由0.87%增至3.20%，增幅达267.81%。发酵5d时，66200～97400的肽段含量较之发酵前1d时降低，而66200以下肽段含量增加，说明食品工业废渣经过发酵，部分大分子蛋白得以降解，并转化为低分子肽。
3讨论
3.1微生物发酵对活菌数和pH的影响
发酵过程中，益生菌和发酵底物中原有微生物利用饲料中的糖分等营养物质逐渐大量增殖，发酵后乳酸菌和酵母菌枯草杆菌活菌数分别达到2.83、1.36和0.65亿CFU/g。王旭明等用玉米－豆粕型日粮添加益生菌发酵，4d后乳酸杆菌数量达到最大值9.5亿CFU/g，2d后酵母菌数达到最大值4.1万/g，同时大肠菌群和腐败菌被抑制。魏爱彬等利用干酪乳杆菌和植物乳杆菌发酵全价饲料，2种菌的单一发酵组和组合发酵组的乳酸菌数量分别在发酵6、4和6d达到最大，分别为994、983和984亿CFU/g，而酵母菌在发酵过程中数量逐渐降低，发酵10d时2种菌的单一发酵组和复合菌种发酵组中的酵母菌活菌数分别为374、365和372亿CFU/g。任佐华利用枯草杆菌、黑曲霉和产朊假丝酵母发酵水稻秸秆，最佳条件下总活菌数可达118亿CFU/g。试验乳酸杆菌活菌数变化趋势与王旭明等相符，魏爱彬等和佐华活菌数较高可能因为发酵底物、发酵时间和菌种组合不同所致。微生物尤其是乳酸菌增殖过程中分泌酸性物质，降低了发酵饲料的pH，发酵后pH降至3.91，可提高发酵饲料的适口性，而酸性环境又可抑制许多有害菌的繁殖，从而可以延长发酵饲料的保藏时间。吴天祥对芭蕉芋酒糟接种嗜酸乳杆菌发酵，7d后pH降至3.8。王旭明等对玉米－豆粕型日粮添加微生物原液固态发酵，pH第4天即降至4以下。试验pH变化趋势与以上试验相符。
3.2常规营养成分的变化
通过益生菌的发酵作用，可使发酵底物中的粗纤维和粗淀粉降解，产生菌体蛋白，提高CP的含量，从而改善食品工业废渣的利用效率。试验中，发酵后CP含量由14.16%增至17.23%。张鑫利用酿酒酵母、白地霉、热带假丝酵母和植物乳杆菌混菌固态发酵马铃薯渣，根据响应面数据得出在最适条件下CP含量可达到36.96%，比发酵前提高了10.22%。试验CP变化趋势与其相符。发酵后，NDF和ADF含量分别降至46.83%和33.62%。NDF是植物细胞壁的成分，反映饲料容积，可用来衡量动物的饱腹度，与家畜采食量呈负相关。日粮中NDF高时，瘤胃容积限制干物质采食量;ADF的木质素比例较高，木质素为不可消化纤维，故ADF适于作为反刍动物饲料消化率指标，与家畜消化率呈负相关。故NDF含量的下降意味着动物采食量的增加，ADF含量的下降则可说明动物消化率的提高。院江等利用乳酸菌和酵母菌等组成的复合菌发酵棉籽壳，10d后测得NDF和ADF含量分别降至(63.10±4.55)%和(49.09±5.26)%。付敏等采用枯草芽孢杆菌、黑曲霉和白地霉对菜籽饼混合固态发酵，5d后测得NDF含量下降了38.70%，ADF含量下降了27.88%。试验NDF和ADF变化趋势与以上试验相近，院江等和付敏等试验结果降幅较大可能因为试验条件差别所致。
3.3活性成分的变化
动物自身分泌的消化酶很难消化植物性细胞壁及细胞壁内的营养物质。饲料工业中一般都会应用粉碎技术来破坏植物细胞壁，但很难将植物细胞壁完全破坏。纤维素酶可协同降解细胞壁，释放单糖等易被畜禽吸收利用的物质，从而明显改善饲料的营养价值。发酵过程中，在混合益生菌的作用下，饲料中纤维素酶活力增至411.8U/g，可有效降解发酵底物中的纤维素成分;经过发酵，蛋白酶活力增至172.4U/g，酶活力的提高可改善发酵饲料的营养价值。任雅萍用益生菌28℃下发酵苹果渣和马铃薯渣72h，自然发酵时:对于苹果渣，在酵母菌和黑曲霉组合，并添加氮素和油渣的条件下，蛋白酶活性最高可达168.50U/g，发酵增率为380.1%;纤维素酶活性最高达3829.63U/g，发酵增率为949.6%;对于马铃薯渣，在米曲霉单菌，并添加氮素和油渣的条件下，蛋白酶活性最高可达478.08U/g，发酵增率为657.0%;纤维素酶活性最高可达564.90U/g，发酵增率为794.5%。试验与以上试验酶活力均增加明显，变化趋势相近，增幅差异可能由于发酵条件不同所致。利用乳酸菌和芽孢杆菌等能分泌蛋白酶的菌种，可在合适微环境下酶解蛋白质底物产生小肽蛋白。同时，也能较大程度地降低植物蛋白中的抗营养成分，如胰蛋白酶抑制剂、脲酶和血凝素等，可有效消除大分子蛋白的抗原性，有利于动物的生长发育和肠道对肽类蛋白的吸收利用。小肽可提高机体蛋白质合成、消除游离氨基酸吸收竞争、增加动物生产性能并能增强矿物元素的吸收利用，对动物营养产业具有重要意义。试验发酵后，小肽含量增幅达267.81%，这可提升微生态饲料的附加值，并可改善动物的生产性能。马文强等利用枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和乳酸菌发酵豆粕，结果表明:发酵后低分子蛋白质含量提高2.25倍。试验小肽含量变化趋势与以上试验相符。
4结论
食品工业废渣经乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌混合发酵5d后，其营养品质得以改善，为食品工业废渣的优化利用提供了参考。
作者：刘华南 高庆军 鲁登位 徐琴 夏天婵 郭春华 饶开晴 彭忠利 单位：西南民族大学生命科学与技术学院 四川省饲料工作总站
