摘要：目的了解宁波市食源性腹泻患者诺如病毒感染情况，为预防控制工作提供依据。方法于２０１３—２０１５年采集宁波市１０家医院门诊接诊的食源性腹泻患者发病３ｄ内的粪便标本２１２９份，采用实时荧光定量ＰＣＲ法检测诺如病毒核酸并进行分型，分析不同时间、不同年龄和性别腹泻患者粪便标本的诺如病毒检出率。结果共检出诺如病毒核酸阳性１１３份，检出率为５３１％；ＧⅠ型、ＧⅡ型和ＧⅠ＋ＧⅡ混合型３种感染模式的检出率分别为０３３％、４８８％和００９％。２０１３—２０１５年各年检出率分别为４５８％、６１６％和４９０％，检出率未见随时间变化趋势（Ｐ＞００５）。０岁～、３岁～、５岁～和１８岁～组患者诺如病毒检出率分别为１１４８％、１７２４％、１２２２％和４１６％，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）。冬春季（１０月—次年３月）检出率为１４７５％，高于夏秋季（４—９月）的２８９％（Ｐ＜００５）。结论宁波市诺如病毒引起的食源性腹泻在冬春季高发，以ＧⅡ型诺如病毒为主，主要感染对象为婴儿和低年龄儿童。
关键词：诺如病毒；食源性腹泻；ＰＣＲ
诺如病毒属杯状病毒科诺如病毒属，广泛存在于海产品和水环境，具有较强的传染性［１］，已成为全球非细菌性急性胃肠炎暴发疫情的主要病原［２－４］。诺如病毒感染一般在冬春季高发，儿童以呕吐为主，成人以腹泻为主［５］。根据基因组和衣壳蛋白核苷酸序列差异，诺如病毒可分为５个基因组（ｇｅｎｅｔｉｃｇｒｏｕｐ，ＧＧ），其中ＧⅠ型和ＧⅡ型是致人急性胃肠炎的病原［６］。为了解宁波市食源性腹泻患者诺如病毒感染情况，对２０１３—２０１５年食源性腹泻患者粪便标本进行诺如病毒核酸检测，现将结果报告如下。
１材料与方法
１.１标本于２０１３—２０１５年采集宁波市１０家医院门诊接诊的食源性腹泻患者发病３ｄ内的粪便标本２１２９份，其中男性１０９１份，女性１０３８份，男女性别比为１０５∶１。患者年龄最小为３个月，最大为８４岁。１.２仪器与试剂ＡＢＩ７５００荧光定量ＰＣＲ仪（美国ＡＢＩ公司），生物安全柜（美国热电公司），旋涡混匀器（德国艾本德股份有限公司），离心机（上海安亭科学仪器厂），无水乙醇（江苏彤晟化学试剂有限公司），生理盐水（石家庄四药有限公司），三氯甲烷（国药集团化学试剂有限公司），ＲｅａｎｓｙＭｉｎｉＫｉｔ病毒核酸提取试剂盒（ＣａｔＮＯ７４１０４，ＱＩＡＧＥＮ公司），诺如病毒ＧⅠ型／ＧⅡ型荧光ＰＣＲ试剂盒（江苏硕世生物有限公司）。试剂均在有效期内使用。１.３方法挑取３颗黄豆大小的粪便（水样便５０～１００μＬ）置于离心管中，加入５ｍＬ生理盐水和５００μＬ三氯甲烷，旋涡混匀器混匀至粪便无块状，２８６０×ｇ离心２０ｍｉｎ，取上清液待用。取２００μＬ粪便上清液，采用ＲｅａｎｓｙＭｉｎｉＫｉｔ病毒核酸提取试剂盒提取核酸，按试剂盒说明书进行操作。将提取好的病毒核酸样本在ＡＢＩ７５００荧光定量ＰＣＲ仪上进行扩增，用ＧⅠ型／ＧⅡ型荧光ＰＣＲ试剂盒分型，试剂配制及荧光ＰＣＲ反应条件参照试剂盒说明书。１.４统计分析采用ＳＰＳＳ１８０软件统计分析，率的比较采用χ２检验，多组间进一步两两比较采用Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法校正检验水准，Ｐ＜００５为差异有统计学意义。
２结果
２.１不同性别患者诺如病毒检出率２１２９份腹泻患者标本中检出诺如病毒核酸阳性１１３份，检出率为５３１％；男性检出率为４７７％，女性检出率为５８８％，两者比较差异无统计学意义（χ２＝１３０５，Ｐ＞００５）。检出ＧⅠ型、ＧⅡ型和ＧⅠ＋ＧⅡ混合型３种感染模式，其中检出ＧⅡ型阳性例数最多，占９２０３％。２.２不同年龄患者诺如病毒检出率０岁～、３岁～、５岁～和１８岁～患者诺如病毒检出率分别为１１４８％（２１／１８３）、１７２４％（５／２９）、１２２２％（１１／９０）和４１６％（７６／１８２７），差异有统计学意义（χ２＝３５４２０，Ｐ＜００５）。两两比较结果显示，０岁～、３岁～、５岁～诺如病毒检出率分别与１８岁～组比较，差异均有统计学意义（χ２＝００００、０００７和０００２，Ｐ＜０００８）。２.３不同年份诺如病毒检出率２０１３—２０１５年诺如病毒检出率分别为４５８％、６１６％和４９０％，检出率随时间变化趋势无统计学意义（χ２趋势＝２２０４，Ｐ＞００５），见表２。２４不同月份诺如病毒检出率夏秋季（４—９月）诺如病毒检出率为０８６％～１０２６％，平均为２８９％；冬春季（１０月—次年３月）检出率为９４３％～３０４３％，平均为１４７５％。冬春季检出率明显高于夏秋季（χ２＝９６６３２，Ｐ＜００５），见图１。
３讨论
诺如病毒引起的腹泻目前尚无针对性预防措施。由于诺如病毒有多个基因组与基因型，每个基因型中包含多个变异毒株，而不同毒株、不同基因型、不同基因组均可能发生重组，因此每隔数年就有变异毒株引起新一轮全球胃肠炎流行［７］。分析结果显示，２０１３—２０１５年宁波市食源性腹泻患者中诺如病毒检出率为５３１％，低于北京市怀柔区的２０８７％［８］，可能与采集食源性腹泻监测（与细菌联检）的肠道门诊标本量有关。宁波市细菌性食源性腹泻发生高峰在每年５—１０月［９］，该季节采集的标本量占总标本量的８６００％（１８３１／２１２９），其他季节采集的标本量仅为总标本量的１４００％（２９８／２１２９），这可能是诺如病毒检出率偏低的原因。感染对象主要为婴儿与低年龄儿童，与王芳等［１０］报道一致。诺如病毒引起的成人食源性腹泻已有较多报道［１１］，本研究也从１８岁～组患者中检出了诺如病毒，这可能与宁波市市民普遍喜食海产品有关［１２］。宁波市食源性腹泻患者中诺如病毒感染有ＧⅠ型、ＧⅡ型和ＧⅠ＋ＧⅡ混合型３种，其中ＧⅡ型占９２０３％，与国内外报道的结果［１３］基本一致。ＧⅠ＋ＧⅡ混合型感染较为少见，本次仅检出２例，原因有待进一步探讨与分析。诺如病毒是引起冬季腹泻的病原之一，被称为“冬季呕吐病”。本研究显示诺如病毒在各月份均有检出，但冬春季检出率明显高于夏秋季，３月份检出率最高（３０４３％），与ＡＨＭＥＤ等［１４］对北半球地区的研究结果一致，但与上海市［１５］检出率在７—１０月份相对较高的结论不同，表明各地区诺如病毒流行高峰不同，诺如病毒感染的防控工作应注意地区差异。综上所述，宁波市食源性腹泻在冬春季高发，诺如病毒流行广泛，感染以ＧＩＩ型为主，婴儿与低年龄儿童为易感人群。应针对上述流行特征加强对食品、饮用水及环境卫生的管理，切断传播途径，加强健康教育，减少诺如病毒的流行与传播。 观光农业论文
作者：傅小红 谢蕾 蔡颖 徐景野 单位：宁波市疾病预防控制中心 宁波市江北区疾病预防控制中心
