1化学成分
1.1多糖类
多糖是叠鞘石斛、铁皮石斛和金钗石斛等具有免疫增强作用、降血糖和抗肿瘤作用的主要活性成分之一[4]。多糖类成分在石斛属植物中含量较高，但不同品种的石斛属植物，如金钗石斛、铁皮石斛、鼓槌石斛、流苏石斛、粉花石斛和细叶石斛等，含量差异较大（6.26%~30.48%），而叠鞘石斛的多糖含量在目前药用的石斛中居中位。此外，不同部位，如根、茎、叶，提取到的多糖成分也存在差异[5]。近年来，张西玉、罗傲霜和许莉等[6-8]对叠鞘石斛多糖成分的研究表明，其含量分别为16.27%、30.4%和10.1%，且野生叠鞘石斛多糖含量比人工栽种的略高[6]。此外，罗傲霜[7]还测定了其分子含量，结果显示多糖的重均分子量为128912，数均分子量为11189，且其摩尔质量分布不均。还有学者尝试将该成分作为叠鞘石斛质量标准的评价指标之一[9]。叠鞘石斛多糖含量存在差异，重要原因之一在于提取工艺和检测方法的选择和优化。常用的多糖提取方法为水提醇沉法，但一些学者对其进行了优化，如罗傲雪等[10]通过设计加水量、回流时间和回流次数3种研究因素的正交实验，表明超声辅助热回流提取法不仅效率高，而且提取时间相对较短，结果更接近真实值。测量多糖含量则多参照2010年版《中国药典》[1]的苯酚-硫酸法，但若单糖去除不完全时会造成测定结果偏高。许莉[8]在研究中采用了二硝基水杨酸溶液法排除了单糖带来的误差，可以准确测定还原糖与总糖含量，同时克服了硫酸强腐性给实验操作带来的极大不便。另有学者[11]也通过改良传统的苯酚-硫酸法进一步优化了多糖的检测方法。
1.2酚类化合物
叠鞘石斛所含的酚类化合物主要包括联苄类和菲类。郑卫平等[13]从叠鞘石斛茎中首次分离得到4,4c-二羟基-3,3c,5-三甲氧基二苄和2,5-二甲基-4-甲氧基菲两种单体化合物。其中，联苄类化合物是叠鞘石斛的特征性成分，也是铁皮石斛、鼓槌石斛具有抗肿瘤活性的有效成分之一[14-15]，它对自由基有良好的清除作用[13]。叠鞘石斛联苄类化合物主要包括石斛酚、杓唇石斛素和鼓槌联苄[16]。学者常将石斛酚成分作为联苄类化合物的指标性化合物进行定量和定性研究，为建立叠鞘石斛的质量标准提供参考。杨莉等[16]通过薄层色谱法（ThinLayerChromatography,TLC）以及高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）测量不同来源的10批叠鞘石斛中的石斛酚含量，结果表明，石斛酚的含量在各样品中差异较大（0.01%~0.21%）。石斛酚的积累动态研究表明，其含量随植株的生长发育而波动，分别在花前期和花期（春季4、5月份），果实前期和果实期（秋季10、11月份）含量增加。陈佳江等[17]通过所建立的HPLC法，检测出叠鞘石斛、鼓槌石斛和金钗石斛均含有石斛酚，但差别依然较大，其中叠鞘石斛的石斛酚含量最高（227.74μg/g），金钗石斛含量最低（12.35μg/g）。在石斛酚的提取工艺优化方面，刘怀伟等[18]以Box-Behnken效应面法及总评“归一值”为评价系统，使石斛酚提取量达到了189.6μg/g，干膏得率为41.27%。
1.3香豆素
香豆素类成分具有松弛平滑肌、扩张血管及抗凝血作用，但有关叠鞘石斛的香豆素研究较少。郑卫平等[12]通过波谱法对产自云南西双版纳的叠鞘石斛的化学成分进行了系统研究，并从中分离到2个香豆素类化合物。此外，李旻等[19]从4批川产叠鞘石斛中提取分离出具有指标性的香豆素成分，含量为0.415～0.432mg/g，进一步建立了其TLC的鉴别方法及HPLC含量测定法，并使其成为了定性和定量的检测川产叠鞘石斛的内在质量的依据之一。于此同时，周晓梅[20]通过所建立的反向高效液相色谱法测定叠鞘石斛的香豆素的平均含量（0.623mg/g）。该成分在流苏石斛这一品种中也有分离出[21]。
1.4滨蒿内酯
滨蒿内酯作为脉络宁注射液的有效成分之一，能抑制血小板聚集，延迟血栓形成并使血栓重量减小。张蕾等[22]尝试从叠鞘石斛内提取出滨蒿内酯成分，并测得其含量为31.8μg/g；叠鞘石斛内滨蒿内酯成分含量相对于密花石斛和短棒石斛较低。此外，有学者[23-24]还陆续探索是否能将滨蒿内酯作为评判不同品种石斛质量的标准之一，结果显示，滨蒿内酯有望作为球花石斛的质量评判标准，但对叠鞘石斛而言，尚需进一步研究。
1.5其他成分
叠鞘石斛因其生物碱类物质含量较低，难以分离鉴定，故鲜有此类文献报道。但金钗石斛的生物碱含量较其他石斛高，这是其发挥抗肿瘤、降血糖、抗氧化以及抗白内障的有效成分之一[25-27]。此外，陈佳江等[28]参照2010年版《中国药典》附录X鞣质含量测定法，采用分光光度法对比分析了叠鞘石斛与本书中收载的金钗、鼓槌和流苏石斛所含的鞣质含量，结果显示，不同品种石斛中鞣质含量差异显著：金钗石斛中鞣质含量高达14.28%，远高于其他品种；鼓槌石斛次之，为3.61%；流苏石斛和叠鞘石斛中含量较接近，分别为1.18%和1.79%。除以上石斛属植物常见成分外，一些学者也相继从叠鞘石斛中分离到一些新的成分。郑卫平等[12]从叠鞘石斛中首次分离鉴定出3-甲氧基-4-羟基反式肉桂酸二十八烷酯、反式对羟基肉桂酸三十烷酯和2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯3种酯类化单体化合物，胡萝卜甙和β-谷甾醇两种物质。潘红玫等[27]从叠鞘石斛的茎中首次分离得到鸟苷、它乔糖苷、vanilloloside和9-β-D-allofuranulsylguanine4种酚苷和核苷类成分，3种新的新木脂素葡糖苷，分别是：(—)-(8R,7′E)-4-hydroxy-3,3′,5,5′-tetramethoxy-8,4′-oxyneolign-7′-ene-9,9′-diol4,9-bis-O-β-D-glucopyranoside(1),(—)-(8S,7′E)-4-hydroxy-3,3′,5,5′-tetramethoxy-8,4′-oxyneolign-7′-ene-9,9′-diol4,9-bis-O-β-D-glucopyranoside(2),and(—)-(8R,7′E)-4-hydroxy-3,3′,5,5′,9′-pentamethoxy-8,4′-oxyneolign-7′-ene-9-ol4,9-bis--O-β-D-glucopyranoside(3)[29]。而许莉等[30]从叠鞘石斛乙酸乙酯部位首次分离得到10个化合物，分别鉴定为松柏醛、香兰素、香草酸、丁香醛、丁香酸、5-乙酰氧甲基糠醛、5-羟甲基糠醛、邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯、草木樨苷甲酯、4,5-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲。目前普遍以叠鞘石斛的茎作为成分研究和提取的主要部位，但近年被广泛开发为保健品花茶饮用的石斛花资源也受到研究者的青睐。有学者[31]从叠鞘石斛花的挥发性成分中共鉴定包括α-亚麻酸、棕榈酸、亚油酸等在内的31种成分，占总含量的72.85%，其中，α-亚麻酸更是叠鞘石斛花的特有成分。
2功效作用
2.1抗肿瘤作用
为了开发具有潜力的抗肿瘤天然药物，罗傲雪等[32]对不同浓度的叠鞘石斛多糖提取物、醇提取物和水提取物进行了体外和体内实验，结果显示，3种提取物均对人肝癌细胞（SMMC-772）的生长有抑制作用，且当叠鞘石斛多糖浓度为160μg/mL并作用48h时，对SMMC-772的增殖生长抑制作用最强，而对机体正常肝细胞（HL-7702）毒副作用较小。而随后进一步的动物实验[33]显示，叠鞘石斛的3种提取物也均对小鼠S180肉瘤有较强抑制作用，其中多糖提取物的抑瘤效果优于醇提取物和水提取物，且受浓度影响不大。此外，实验还观察到多糖处理组的肿瘤细胞有明显的细胞凋亡特征[27]。
2.2增强免疫力作用
天然产物的抗肿瘤效果往往与增强免疫力有密切关系。罗傲雪等[34]测定了叠鞘石斛多糖提取物、醇提取物和水提取物作用后小鼠的胸腺指数和脾指数，结果显示，多糖组小鼠的免疫指数有极显著上升，表明叠鞘石斛多糖能保护并促进荷瘤小鼠免疫功能恢复。此外，杨仲等[35]在叠鞘石斛多糖提取物对小鼠免疫细胞影响的研究中发现，它能够促进淋巴细胞增殖，从而正向调节机体的体液免疫和细胞免疫；低浓度石斛多糖提取物对小鼠淋巴细胞的增殖无明显作用。同时，该实验[35]还证实，叠鞘石斛多糖提取物能够正向调节小鼠腹腔巨噬细胞的免疫作用，提示其也能够促进机体非特异性免疫应答。另有研究[36]表明，从叠鞘石斛中提取的中性多糖能够促进免疫器官提高免疫力和促进免疫细胞分泌免疫分子，从而使机体免疫能力在器官水平和分子水平均得到增强。
2.3降血糖作用
研究者[37]将叠鞘石斛多糖作为受试物对小鼠进行灌胃给药后，四氧嘧啶高血糖小鼠空腹血糖显著降低，四氧嘧啶高血糖大鼠糖耐量增强，正常血糖小鼠血糖和正常血糖大鼠糖耐量不受明显影响，提示叠鞘石斛多糖有较好的降血糖作用，且安全性较好。进一步推测，多糖降血糖的机制可能与其清除自由基，抑制脂质过氧化反应，对抗四氧嘧啶的B细胞损伤，促进B细胞的修复与再生密切相关。
2.4抗氧化活性作用
叠鞘石斛抗氧化活性的有效成分为联苄类化合物和多糖成分。联苄类提取物[13,38]能够有效清除机体代谢活动产生的超氧阴离子和羟自由基等活性氧自由基，从而使机体能够避免由于自由基失调而诱发多种疾病。研究还证实[13]，其对自由基的作用效果在一定程度上优于抗氧化剂Vc，且具有浓度范围内的量效关系。而叠鞘石斛多糖成分对1,1-苯基苦基苯肼自由基、羟基自由基也具有较好的清除率，对Fe2+具有很好的螯合率，且对脂质过氧化有明显的抑制作用[39]。另有学者[34,40]研究证实，叠鞘石斛的多糖成分能使小鼠血清中的超氧化物歧化酶活力上升，丙二醛含量降低，从而具有较强的抗氧化活性。
2.5促进肠胃运动
叠鞘石斛的醋酸乙酯提取物对小鼠小肠运动有良好的促进作用，炭末推进百分率的均数达到了53.55%[41]。朱丽娜等[42]通过整体动物实验表明，叠鞘石斛的醇和水的混合提取物对小鼠肠推进和胃排空具有促进作用；叠鞘石斛可明显刺激小鼠胃组织中降低的一氧化氮水平回升，对小鼠乙醇性胃粘膜损伤具有保护作用，还可提高粘膜的抗损伤能力，但作用效果强弱较其他石斛有所不同。有学者[43]通过浸膏灌胃对小鼠胃肠推进运动观察表明，束花石解可明显抑制胃肠推进运动，金钗石解对胃肠推进作用无明显影响。
2.6其他作用
对叠鞘石斛的醇粗提取物进行抗凝研究[44]发现，6g/kg的干燥提取物连续给药5d能明显降低小鼠体内血栓的形成，降低动物病死率，因而其抗凝作用明显。另有学者[45]发现，从叠鞘石斛茎中分离的2,5-羟基-4-甲氧-菲，2-O-β-d-吡喃葡萄糖苷和5-甲氧-2,4,7,9S-羟基-9,10-二氢菲可通过抑制促分裂原活化蛋白激酶以及转录因子κB通路发挥抗炎作用。此外，Fang等[46]通过鼠晶体的体内和体外实验证实，叠鞘石斛的石斛酚可通过抑制醛糖还原酶和可诱导的氮氧化物合成酶基因的表达抑制乳糖诱导的白内障的形成，保持晶体的透明度。
3讨论
我国的石斛属资源非常丰富，但目前仍有多种石斛类中草药（包括叠鞘石斛等多种已有悠久的入药历史的石斛类中草药）未收录进中国药典（2010版《中国药典》仅收录4种石斛类中草药）。而中草药发挥疗效的物质基础是其所含的化学成分。从已有研究来看[4-5,12,14-15,17,21,43,48]，石斛属植物所含化学成分、结构类型众多，多糖类、酚类化合物等是石斛属较为重要的共同有效成分。然而，不同品种石斛所含成分及其含量有较大差异[47]，一些研究者[48-51,21]也从不同品种的石斛中分离到不同的新成分。而叠鞘石斛作为石斛属的一种，其化学成分与已收入药典的石斛种类有相似也有区别，可研究性较大，提示后期可重点从以下3个方面进一步研究：1）对多糖、酚类化合物、香豆素等有效成分进行提取并优化提取工艺；2）进一步探究所提取的成分和活性之间关系以及机制；3）继续完善对叠鞘石斛这一品种的质量标准的评价体系。总之，对叠鞘石斛这一西南地区的石斛主流品种的化学成分和功效进行研究，不仅有利于合理利用有限的石斛属植物资源，也可为开发相关新药和扩大药源提供更多的科学依据。
作者：冯煜 邓晓东 陈泓羽 段铁 张在强 余小平 张薇薇 单位：成都医学院 四川出入境检验检疫局四川国际旅行卫生保健中心
