戊唑醇为广谱三唑类杀菌剂，用量低，对种子携带的各种病原普遍有效，尤其适用于黑穗病的防治［1～2］。戊唑醇的残留分析方法国内外大多采用高效液相色谱法(HPLC)［3～5］、气相色谱－串联质谱法(GC－MS)等［6～9］。有关戊唑醇在土壤、蔬菜基质中的残留检测已有一些相关报道，大多采用高效液相色谱法。目前，尚未见有关戊唑醇在香蕉中的膳食暴露风险评估这一方面的研究报道［10］。笔者研究建立了一种简单、快速检测香蕉和土壤中戊唑醇残留量的方法，并采用该方法研究戊唑醇在香蕉施用后的残留消解动态和最终残留的同时进行了风险评估。
1材料和方法
1．1主要仪器和药剂
Waters高效液相色谱仪(带2487紫外检测器);高速分散均质机(德国IKA广州仪科实验室技术有限公司)、旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)、微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)。戊唑醇(Tabuconazole)标准品，纯度≥99．0%［购自中国计量科学研究院］;25%戊唑醇乳油;乙腈为色谱纯(Fisher公司);实验室用水为超纯水(ULUPUＲE);其余试剂为国产分析纯;StrataNH2(55μm，70A)1000mg/6mL固相萃取柱。海南试验地点为海口市，云南试验地点为玉溪市。品种均为巴西香蕉。
1．2田间试验
按照“农药残留试验准则”［11］进行，供试药剂为25%戊唑醇乳油。1．2．1施药和样本采集主要有:(1)残留消解动态试验。施药剂量(有效成分)为450mg•kg－1，于果实生长初期将制剂对水稀释后均匀喷洒在香蕉果实上，施药1次，于施药后2h和1、3、7、14、21、28、42、60d采集香蕉样本。在香蕉地旁另选一块20m2空地做土壤残留消解动态试验，施药剂量(有效成分)为450mg•kg－1(推荐剂量的1．5倍)，对水后往返均匀施药，于施药后2h和1、3、7、14、21、28、42、60d采集土壤样本。(2)最终残留试验。分别采用推荐剂量有效成分300mg•kg－1和450mg•kg－1进行植株喷雾处理，施药间隔期7d，各施药3和4次。分别于末次施药后35、42和49d用随机的方法在试验小区(树)采集12条以上(不少于2kg)的香蕉个体(要求生长正常、无病害、成熟)。土壤样本在树冠覆盖范围内随机取5～10个点，用土钻采集耕作层的土壤约2kg。1．2．2样品制备分别将全蕉和蕉肉样品切段、混匀后留样500g，采集好的土壤样本除去杂物，混匀后留样500g，制备好的样品于－20℃冰柜中保存。
1．3分析方法
1．3．1提取主要有：(1)香蕉样品。称取25．00±1g的香蕉样品，置于150mL烧杯中，加入50．0mL乙腈，1800r•min1匀浆2min后用滤纸过滤，滤液收集于装有约5g氯化钠的具塞量筒中，密封后剧烈震荡2min，在室温下静置1h以上，使有机相和水相分层，准确吸取上清液10．0mL于50mL圆底烧瓶中，减压浓缩(40℃)至干，用5．0mL二氯甲烷－甲醇(体积比90:10)淋洗液溶解，待净化。(2)土壤样品。称取25．00±1g的样品，置于具塞锥形瓶中，加入50．0mL乙腈，超声提取1h后用滤纸过滤，滤液收集到装有10．0mL水和7．0g氯化钠的100mL具塞量筒中，密封后剧烈震荡2min，在室温下静置1h以上，使有机相和水相分层，准确吸取上清液10．0mL于50mL圆底烧瓶中，减压浓缩(40℃)至干，用5．0mL二氯甲烷－甲醇(体积比90∶10)淋洗液溶解，待净化。1．3．2净化香蕉样品、土壤样品:NH2固相萃取小柱用5．0mL上述淋洗液预淋洗，当淋洗液液面高于柱吸附层表面约1mm时，立即倒入待净化溶液，用50mL圆底烧瓶收集，重复三次用5．0mL淋洗液冲洗圆底烧瓶残留物后淋洗NH2小柱。收集液减压浓缩(40℃)至干，用2．50mL甲醇定容后用0．45um有机滤膜过滤，待测。1．3．3高效液相色谱条件SunFireTMC18柱，膜厚5μm，150mm×4．60mm;紫外检测器，波长220nm;流动相:V(乙腈)∶V(水)=60∶40，流速1．0mL•min－1;柱温35℃;进样体积10μL;戊唑醇保留时间约5．7min。1．3．4标准曲线的制作准确称取0．01g戊唑醇标准品用甲醇配制1000μg•mL－1戊唑醇标准贮备液，用甲醇逐级稀释成10、5、1、0．1、0．02ug•mL－1标准溶液，见谱图1。按所建的色谱条件进行色谱检测，以戊唑醇标准溶液进样的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，绘制戊唑醇标准曲线，相关系数Ｒ2=0．9999，见谱图2。
1．4膳食风险评估方法
采用风险商值(ＲQ)进行戊唑醇的膳食风险评估。由(1)和(2)式［12～13］计算得出膳食暴露和风险评估结果。EED=(CＲL×FI)/bw(1)式中:EED为估计暴露量，mg•kg－1bwCＲL为理论残留量，mg•kg－1FI为食物摄入量，kgＲQ=EED/ADI(2)式中:bw为体重，kgＲQ为风险商值ADI为每日允许摄入量，mg•kg－1bwＲQ数值的大小可体现风险的大小，当ＲQ大于1时，数值越大风险越大;当ＲQ小于1时，数值越小风险越小。
2结果与分析
2．1方法的线性范围和检出限
在0．02～10mg•L－1范围内，戊唑醇的质量浓度与峰面积之间存在显著的正相关，其线性回归方程:y=44201x+17365，Ｒ2=0．9999。采用向空白样品中逐级降低标准品添加水平的方法来确定方法的定量限(LOQ)。戊唑醇在香蕉全蕉、蕉肉和土壤中的最小检出量均为2．0×10－10g，定量限均为0．02mg•kg－1。
2．2方法的准确度与精密度
在未施用过戊唑醇的对照全蕉、蕉肉和土壤中添加戊唑醇标准溶液，添加水平分别为0．020、0．050和0．500mg•kg－1，每个水平设5次重复，按本文所述方法进行添加回收率测定。结果见表1。戊唑醇在0．020～0．500mg•kg－1的添加水平下，平均回收率在84%～101%范围内，相对标准偏差在1．1%～12．3%范围内，其准确度和精密度满足农药残留分析试验的要求［14］。
2．3消解动态
两地的试验结果均表明，戊唑醇在全蕉中残留量的最高值出现在施药后当天，21d后其降解率达50%以上，42d时达80%左右，60d时均达90%以上，结果见表2。戊唑醇在香蕉中的半衰期海南、云南分别为18．9d和19．8d。戊唑醇在土壤中残留量的最高值出现在施药后当天，14d后其降解率达50%以上，42d时达80%左右，60d时均达90%以上。其消解动态符合一级反应动力学模式(见表2)。戊唑醇在香蕉中的半衰期海南、云南分别为15．5d和14．1d。
2．4最终残留
采用25%戊唑醇乳油按推荐剂量(300mg•kg－1)和1．5倍推荐剂量(450mg•kg－1)于香蕉结果期施药，第1、2次施药在断蕾前植株喷雾;第3、4次施药在断蕾后果穗套袋植株喷雾;每次间隔7d，距最后一次施药间隔35d、42d和49d采样测定，全蕉、蕉肉和土壤中戊唑醇残留量，间隔35d时分别为0．0262～0．0582mg•kg－1、0．0207～0．0415mg•kg－1和0．0268～0．1760mg•kg－1;间隔42d时分别为＜LOQ～0．0472mg•kg－1、＜LOQ～0．0258mg•kg－1和＜LOQ～0．0475mg;间隔49d时分别为＜LOQ～0．0230mg•kg－1、＜LOQ～0．0207mg•kg－1和＜LOQ～0．0300mg•kg－1。结果见表3。
2．5膳食暴露和风险评估
根据我国国家相关标准的规定［15～17］，戊唑醇的ADI为0．03mg•kg－1•bw，按照我国人均体重63kg计算，则人均日允许摄入量为1．89mg。根据《中国居民膳食指南》，我国人均膳食结构中水果的每日摄入量，成年人一般为200～400g，结合笔者研究测得的香蕉中戊唑醇的最终残留量最高为0．089mg•kg－1，可以推断我国每人每天通过香蕉所摄入的戊唑醇最大量为0．0356mg，风险商值(ＲQ)仅为0．022，远小于1，其膳食暴露风险较低，处于可接受的安全水平。
3结论与讨论
建立了高效液相色谱－紫外分析法测定戊唑醇在香蕉中残留的分析方法。其前处理操作简便、省时、便于掌握，在0．02～0．50mg•kg－1范围内，该方法的峰面积与进样质量浓度间呈良好的线性关系，其最小检出量为2．0×10－10g，定量限(LOQ)为0．02mg•kg－1。消解动态试验结果表明:戊唑醇在海南、云南2个试验点的香蕉全蕉中的消解半衰期分别为18．9d和19．8d。云南试验点的半衰期较长，农药降解速率较慢，分析其原因可能是海南基地温度和湿度均高于云南基地，温度的升高使农药粘度降低，水分的增加可提高农药的化学水解，有利于微生物对农药的代谢降解。最终残留试验结果表明:25%戊唑醇乳油按推荐剂量和1．5倍推荐剂量处理，测得香蕉全蕉和蕉肉中戊唑醇的最高残留量分别为0．0386和0．0582mg•kg－1，在最后一次施药42d或以后收获的香蕉全蕉和蕉肉中戊唑醇的残留量均未超过CAC和欧盟规定的戊唑醇在香蕉上的MＲLs0．05mg•kg－1。由于目前我国未制定戊唑醇在香蕉中的MＲL值，因此，建议我国可与国际接轨暂定戊唑醇在香蕉中的MＲL值为0．05mg•kg－1，安全间隔期为42d，25%戊唑醇乳油在香蕉上的有效使用剂量不得高于450mg•kg－1，施药次数不得超过3次。尽管笔者研究进行的风险评估结果显示，戊唑醇在香蕉中的残留处于安全水平，但由于笔者研究仅估算了香蕉中残留的戊唑醇，尚未考虑通过其他途径可能摄入的戊唑醇对人体的影响，如大豆、水稻、小麦、蔬菜、苹果、葡萄以及玉米高粱等作物，因此其安全风险需进一步确定。
作者：吴琼 罗金辉 谢德芳 沈雪明 王素茹 单位：中国热带农业科学院分析测试中心 海南省热带果蔬产品质量安全重点实验室
