１材料与方法
１．１对象
按纳入标准及排除标准，随机选取木垒地区哈萨克族ＣＰ患者１９２人，ＣＰ诊断符合牙周病学（第３版）［３］诊断标准。男性１１６例，女性７６例，年龄２９～７０岁，平均年龄（５０．１７±１０．１２）岁。另随机选取１００名健康人作对照组，男性，５２例，女性４８例，年龄３２～６５岁，平均年龄（４９．１２±９．４０）岁。纳入标准：１）ＣＰ组：临床诊断为ＣＰ患者，年龄≥１８岁，全口牙数＞１５颗，探诊深度（ｐｒｏｂｉｎｇｄｅｐｔｈ，ＰＤ）≥３ｍｍ，附着丧失（ａｔｔａｃｈｍｅｎｔｌｏｓｔ，ＡＬ）＞０ｍｍ；２）排除全身系统性疾病；３）无妊娠；４）无肝炎、ＨＩＶ及其他传染病史；５）无吸烟者；６）近３个月内没有接受过牙周治疗者。排除标准：１）全身状况较差，全口存留牙齿少于１５颗或者全口牙列缺失者；２）曾经吸烟患但戒烟未超过５年者；３）近６个月内接受抗生素治疗；４）近２个月之内使用过含有抗菌性漱口剂［３，４］。
１．２检测方法
１）口腔检查：选择受检者１７、１６、１１、２６、２７、３１、３６、３７、４６、４７共１０颗牙齿，若缺失以近中相邻牙位代替，检查每个牙位的近中颊，正中颊，远中颊和近中舌（腭），正中舌（腭），远中舌（腭）６个位点，共不少于４０个位点，记录ＰＤ、ＡＬ等牙周炎临床指标。２）采集受检者非刺激性全唾液５ｍＬ。３）采集受检者空腹静脉血液５ｍＬ，检测前１２ｈ内禁食油腻食物及水等。
１．３检测项目
－２０℃唾液及外周血样本室温解冻，采用抗体夹心ＥＬＩＳＡ法测定ＣＰ患者与健康人群的唾液及血液中ＩＬ－１７、ＩＬ－６的总量和浓度。ＩＬ－６、１７ＥＬＩＳＡ试剂盒（武汉优尔生科技股份有限公司）。主要步骤：１）抗人ＩＬ－６、ＩＬ－１７抗体包被于酶标板上，标准品与待测样本以１∶３稀释，每孔加入２５μＬ，３７℃孵育２ｈ，洗板；２）加检测溶液Ａ１００μＬ，３７℃孵育１ｈ，洗板；３）加检测溶液Ｂ１００μＬ，３７℃孵育３０ｍｉｎ，洗板；４）加ＴＭＢ底物９０μＬ，３７℃孵育１５～２５ｍｉｎ，甩弃；５）加终止液５０μＬ，用酶标仪在４５０ｎｍ波长下测定Ａ值，通过绘制标准曲线求出样本中的ＩＬ－６及ＩＬ－１７的水平。
１．４统计学处理
用ＳＰＳＳ１７．０软件进行统计分析，计量资料比较采用两组独立样本的ｔ检验，相关性采用秩相关检验。检验水准α＝０．０５，α＜０．０５差异有统计学意义。
２结果
２．１血清及唾液中ＩＬ－６、ＩＬ－１７浓度比较
健康组与ＣＰ组比较：１）血清ＩＬ－１７及唾液ＩＬ－６、ＩＬ１７均为ＣＰ组略高于健康组，但无统计学差异；２）血清ＩＬ－６含量为健康组高于ＣＰ组，且存在统计学差异。ＣＰ组中比较细胞因子，无论是血清还是唾液都为ＩＬ－１７含量高于ＩＬ－６；２）相同因子唾液中含量明显高于血清中的。
２．２牙周炎患者炎症因子相关性分析
牙周炎患者中相同因子的不同部位检测所得结果均无相关性；在同一部位检测出的目标因子所得结果为唾液中二者具有相关性，且为中高度相关（ｒ＝０．５３３，Ｐ＝０．０００），但血清中结果相反。
２．３牙周炎患者炎症因子与牙周指标相关性分析
２．３．１与ＰＤ的相关性分析
唾液ＩＬ－６与ＰＤ为高度相关（ｒ＝０．６９７，Ｐ＝０．０００），唾液ＩＬ－１７与ＰＤ为中度相关（ｒ＝０．５６７，Ｐ＝０．０００），血清中二者与ＰＤ均无相关性。
２．３．２与ＡＬ的相关性分析
唾液ＩＬ－６与ＡＬ为高度相关（ｒ＝０．７４０，Ｐ＝０．０００），唾液ＩＬ－１７与ＡＬ为中度相关（ｒ＝０．５４０，Ｐ＝０．０００），血清中二者与ＡＬ均无相关性。
３讨论
快速唾液细胞因子检测被看做是一种无创检测方法且可监测牙周疾病活动［５］。在免疫应答中，多样Ｔ细胞亚型在疾病发生和发展中起不同作用：Ｔｈ１７细胞对牙周炎免疫平衡有破坏作用，但Ｔｈ２细胞有保护作用，而Ｔｈ１细胞影响不显著［４］。有研究表明在健康人龈沟液中未检测出ＩＬ－６，而在慢性牙周炎患者龈沟液中检测出较高水平的ＩＬ－６；慢性牙周患者在接受非手术治疗后龈沟液，唾液，外周血及炎症组织中炎症因子ＩＬ－６与ＩＬ－１７等的浓度含量明显低于治疗前［２，３］，由此推测，健康人龈沟液、唾液、外周血及炎症组织中炎症因子水平较慢性牙周炎患者浓度含量很低［６］。本实验以新疆木垒地区哈萨克族人群为研究对象，取得非刺激性全唾液及外周血调查分析得知，慢性牙周炎患者血清ＩＬ－１７，唾液ＩＬ－６、ＩＬ－１７浓度均较健康人高，但差异无统计学意义，不排除该地区普遍存在牙周炎的危险因素，健康人群为潜在的牙周炎患病者且机体正处于免疫应答可能。另一方面，慢性牙周炎患者在接受牙周基础治疗后，炎症因子ＩＬ－６的水平较治疗前高［７］是由于机体处于免疫应答状态中由Ｔｈ２的保护机制促进ＩＬ－６的分泌［５］，故可解释本研究中健康人血清中ＩＬ－６有悖常理的高于牙周炎患者。在分析牙周炎患者的测量指标后可发现：唾液中的ＩＬ－６及ＩＬ－１７两种因子浓度含量明显高于血清中的浓度含量。那么，这也印证了唾液细胞因子的测定可用于较大范围人群中的普查，将牙周炎患者筛选出来［８］。在牙周炎患者的免疫应答中所分泌的炎症因子的作用也是微妙的：如Ｔｈ２分泌的ＩＬ－６与ＩＬ－１β共同作用可调节加强Ｔｈ１７分泌ＩＬ－１７［９］，但牙周炎患者牙龈上皮细胞和成纤维细胞的研究发现，ＩＬ－１７的高浓度表现又可显著刺激ＩＬ－６分泌［１０］。而本实验发现牙周炎患者唾液中ＩＬ－６浓度含量与ＩＬ－１７浓度含量呈正相关性且相关性较高（ｒ＝０．５３３，Ｐ＝０．０００），这也说明了它们彼此相互影响。不仅如此，研究指出ＩＬ－１７浓度含量水平明显增高与牙龈组织破坏和牙槽骨吸收有密切联系。如在患者病变的牙槽骨中，ＩＬ－１７和骨吸收因子ＲＡＮＫＬ都表达丰富，且浓度较高，甚至ＩＬ－１７在指导调节ＲＡＮＫＬ的同时对牙周骨重塑发挥破坏性作用。另一个因子ＩＬ－６则是通过非手术治疗前后比较发现牙周临床指标随着ＩＬ－６浓度降低而减轻［１１］。这说明炎症因子水平与牙周临床指标也有密切联系，本实验也证明这点：唾液ＩＬ－６、ＩＬ－１７与ＰＤ、ＡＬ呈较高的正相关关系。综上所述，在新疆的哈萨克族人群中经过唾液和血清ＩＬ－６、ＩＬ－１７及牙周临床指标的共同检测发现，此民族的唾液ＩＬ－６、ＩＬ－１７浓度含量较高，虽二者因子的分泌机制不同，但表现彼此相关，且与患ＣＰ病情严重程度呈正相关性，故可能作为萨克族慢性牙周炎患者的诊断标志物。同时也进一步证明了哈萨克族人群在分子水平上与以往的研究对象结果一致，为研究哈萨克族牙周炎患者的唾液中炎症因子ＩＬ－６、ＩＬ－１７的基因多态性打下了基础。
作者：宋倩 单位：乌鲁木齐市口腔医院牙周粘膜科
