ＫａｕｆｍａｎｎＭ等发现新辅助化疗获得完全缓解的患者无病生存率（ｄｉｓｅａｓｅｆｒｅｅｓｕｒｖｉｖａｌ，ＤＦＳ）及总生存率（ｏｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌ，ＯＳ）明显改善［１］，但并不是每个乳腺癌患者均能从新辅助化疗中获益，反而带来治疗的延迟或疾病进展。近些年，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｓｎａｉｌ在肿瘤浸润和转移中的作用成为研究的热点。本研究利用活检获得化疗前的乳腺癌组织，通过免疫组化ＳＰ法检测Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｓｎａｉｌ的表达，探讨二者联合检测对新辅助化疗的疗效及预后的意义。
１材料与方法
１．１资料收集２００８年１月至２０１２年６月郑州大学第一附属医院乳腺外科确诊的原发性Ⅱ～Ⅲ期，按国际抗癌联盟标准进行分期，无其他恶性肿瘤病史乳腺癌患者１６９例，新辅助化疗前经活检证实病理类型均为浸润性乳腺癌。患者均为女性，年龄２６～７６岁，平均年龄４５８岁，一般情况良好，初诊时肿块均可扪及，中位随访是５０个月。所有患者在就诊前均未接受过任何治疗，在首次治疗均证实无远处转移及无化疗禁忌证。活检确诊后所有患者均行ＴＡＣ方案化疗４个周期后手术。活检标本均行常规石蜡切片及免疫组化。１．２治疗方案及疗效评估所有患者均行ＴＡＣ方案：吡柔比星５０ｍｇ／ｍ２，ｄ１，环磷酰胺５００ｍｇ／ｍ２，ｄ１，多西他赛７５ｍｇ／ｍ２，ｄ１，静脉滴注。２１ｄ为１个周期。４个周期后，行临床体检及影像学检查，评估疗效，并根据临床评估决定手术方式。新辅助化疗前行卡尺及彩超测量肿块的最大径及垂直径，同一患者在化疗前后采用同一种测量手段，每周期复查１次。临床疗效评估根据ＷＨＯ实体瘤疗效评价标准分为：完全缓解（ＣＲ）、部分缓解（ＰＲ）、稳定（ＳＤ）、疾病进展（ＰＤ）。ＣＲ＋ＰＲ为有效，ＳＤ＋ＰＤ为无效。１．３乳腺癌标本收集及处理标本取自活检获得的乳腺癌组织，用１０％福尔马林固定，常规石蜡包埋，行４μｍ连续切片，进行ＨＥ染色和Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｓｎａｉｌ免疫组化染色。１．４实验材料鼠抗人Ｓｎａｉｌ（Ｈ－１３０）抗体购自美国Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司，即用型鼠抗人Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ抗体为福州生物技术中心，免疫组化试剂盒、ＤＡＢ显色试剂购于北京中杉金桥生物公司，用已知阳性片作为阳性对照，用ＰＢＳ代替一抗作为阴性对照。１．５免疫组化结果判定阳性切片Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ免疫组化位于细胞膜或细胞质，Ｓｎａｉｌ免疫组化位于细胞核，均为淡黄色或棕黄色颗粒，免疫组化强度参照Ｆｏｒｍｗｉｔｚ评分方法，根据阳性细胞的百分率（每片随机观察５个４０×１０倍视野，对其中的阳性细胞计数）及显色情况分级，根据二者的乘积，将染色情况分为４级：０分为（－），１～４分为（＋），５～８分为（＋＋），９～１２分为（＋＋＋）。－～＋为低表达，＋＋～＋＋＋分为高表达。随访信息通过电话随访或门诊随访获得。１．６统计学方法应用ＳＰＳＳ１７．０软件分析，采用χ２检验及Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析，Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意义。
２结果
２．１Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｓｎａｉｌ在乳腺癌组织中的表达水平与临床病理特征的关系在１６９例乳腺癌组织中，其中Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ高表达８２例，低表达８７例；Ｓｎａｉｌ高表达９９例，低表达７０例（图１）；Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达均与临床分期、组织学分级、淋巴结转移相关（Ｐ＜０．０５）；与年龄、月经状况、肿瘤大小以及ＥＲ和ＰＲ状态无关。Ｓｎａｉｌ表达均与临床分期、淋巴结转移相关（Ｐ＜０．０５）；与年龄、月经状况、组织分级、肿瘤大小以及ＥＲ和ＰＲ状态无关。见表１。２．２乳腺癌组织中Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｓｎａｉｌ的表达与临床获益率的关系Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ低表达组的临床总有效率高于高表达组，而在化疗抵抗（ＳＤ＋ＰＤ）方面，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ高表达组明显多于低表达组。这表明Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ低表达与新辅助化疗获益率高相关。Ｓｎａｉｌ低表达组的临床总有效率高于Ｓｎａｉｌ高表达组，化疗抵抗（ＳＤ＋ＰＤ）Ｓｎａｉｌ高表达组高于低表达组。这表明Ｓｎａｉｌ低表达与新辅助化疗获益率低相关。见表２。２．３乳腺癌中Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｓｎａｉｌ表达的相关性两者在乳腺癌组织中的表达存在负相关（ｒ＝－０．２４１，Ｐ＝０．００２）。见表３。
３讨论
乳腺癌新辅助化疗作为局部晚期乳腺癌的标准治疗方案已经获得国内外高度认可。但是临床研究发现还有约２５％的患者并不能从新辅助化疗中获益，所以在新辅助化疗前评估化疗疗效显得尤为重要。研究显示，上皮－间质转化（ＥＭＴ）与肿瘤侵袭和转移有关［２］。其细胞机制为上皮标记基因的表达与细胞间黏附力的丧失，间质标记基因、细胞迁移与运动力的获得和细胞形态的改变［３］。ＥＭＴ和癌细胞脱离原发部位在浸润转移过程中起重要作用［４］。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｓｎａｉｌ在ＥＴＭ中发挥重要作用。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉ参与和维持细胞间连接，其表达的缺失或者细胞与细胞间连接的功能减弱是ＥＭＴ过程中重要的一步。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达减少或缺失是肿瘤侵袭和转移的重要促进因素［５］。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ在同时伴有侵袭和转移行为的多种不同类型的肿瘤细胞中的表达通常是下调的［６－７］，其表达下调与预后不良有关［８］。既往也发现人体恶性肿瘤细胞中Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的低表达，肿瘤浸润能力强、淋巴结转移和远处转移率高，生存率低。研究发现，约７０％的原发性乳腺癌中存在Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的表达减少或缺失。本研究结果与上述文献研究结果一致，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的表达与组织学分级、临床ＴＮＭ分期，以及淋巴结转移有统计学差异（Ｐ＜００５）。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ呈低表达组的临床总缓解率高于高表达组，这提示Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ低表达与新辅助化化疗获益率高相关。Ｓｎａｉｌ属于转录抑制因子，具有阻遏抑癌基因ＣＤＨ１编码的因子，而基因ＣＤＨ１编码了关键黏附蛋白Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ，从而导致Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的转录抑制，进而导致ＥＭＴ的发生并提高细胞侵袭转移的能力［９］。在人类多种恶性肿瘤，Ｓｎａｉｌ的表达上调与肿瘤的侵袭、转移及较差的预后密切相关［１０］。本研究结果Ｓｎａｉｌ的表达与肿瘤大小、临床ＴＮＭ分期，以及淋巴结转移差异有统计学意义（Ｐ＜００５），表明Ｓｎａｉｌ的表达与乳腺癌的浸润和转移密切相关。Ｓｎａｉｌ呈低表达组的临床总缓解率高于高表达组，这提示Ｓｎａｉｌ高表达与新辅助化化疗获益率低相关；研究发现，Ｓｎａｉｌ表达上调，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达下降，二者表达呈逆反关系［１１］。本研究结果显示，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ低表达与新辅助化化疗获益率高相关，Ｓｎａｉｌ高表达与新辅助化化疗获益率低相关。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｓｎａｉｌ的表达经Ｓｐｅａｒｍａｎ秩相关分析，两者在乳腺癌中的表达存在负相关（ｒ＝－０２４１，Ｐ＝０００２），与大多文献报道一致。因此，联合检测Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ与Ｓｎａｉｌ可为评估乳腺癌新辅助化疗疗效提供权威医学期刊参考指标。
作者：董佳寒 苏静 陈航航 单位：郑州大学第一附属医院乳腺外科
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