1实验方法
1.1中和剂鉴定试验试验菌为单增李斯特菌，试验设平行6组，按照2002年版《消毒技术规范》中规定的中和剂鉴定试验程序进行试验。结果，以第1组无菌生长或菌数远少于第2组;第2组菌数较第1组为多，但较第3、4、5组为少;第3、4、5组的组间误差率不超过15%;第6组无菌生长，3次重复试验结果一致，为所选中和剂及其浓度适宜。1.2悬液定量杀菌试验试验分为2组，菌悬液内不加有机干扰物实验组(清洁条件)和菌悬液内以1∶1加入浓度为30g/L小牛血清蛋白作为有机干扰物实验组。试验在20℃水浴中进行，在无菌试管内先加入0.5ml试验用菌悬液，再加入0.5ml有机干扰物混匀，然后加入所需浓度的消毒液4.0ml(阳性对照组用无菌稀释液)混匀。作用至规定时间，取0.5ml样液加于含4.5ml中和剂试管内，混匀。中和作用10min，取1ml样液接种于无菌平皿，倾注琼脂，凝固后置37℃培养箱中培养48h，观察结果，计算杀灭率。试验重复3次。
2结果
2.1中和剂鉴定试验结果结果表明，用含5g/L硫代硫酸钠+3g/L卵磷脂+10g/L吐温80的PBS组成的中和剂，可有效中和本试验所用4种消毒液对试验菌的残余作用，中和剂和中和产物对试验菌及培养基均无影响，符合中和剂的要求。2.2悬液定量杀菌试验结果结果表明，用浓度为100mg/L过氧乙酸消毒液作用1min，菌悬液内无论加与不加有机干扰物，均可对悬液内单增李斯特菌杀灭率达到100%;提高过氧乙酸消毒液的浓度或延长作用时间均可提高其对单增李斯特氏菌的杀灭效果(表1)。用浓度为20g/L过氧化氢消毒液作用30min，无论在菌悬液内加与不加有机干扰物对悬液内单增李斯特菌的杀灭率均为100%;提高过氧化氢消毒液的浓度或延长作用时间均可提高其对单增李斯特菌的杀灭效果(表2)。在清洁条件下，用100mg/L二氧化氯消毒液作用1min，对悬液内单增李斯特菌的杀灭率为100%;在菌悬液内加有机干扰物条件下，二氧化氯消毒液浓度需增加到400mg/L作用3min，对悬液内单增李斯特菌的杀灭率可达到100%。提高二氧化氯消毒液的浓度或延长作用时间均可提高其对单增李斯特氏菌的作用效果(表3)。在清洁条件下，用有效氯100mg/L次氯酸钠消毒液作用1min，对悬液内单增李斯特菌的杀灭率为100%;在菌悬液内含有机干扰物条件下，次氯酸钠的有效氯浓度需提高到200mg/L，作用时间延长至30min，对悬液内单增李斯特菌的杀灭率方可达100%。(表4)。
3讨论
单核细胞增生李斯特菌是一种致死率极高的食源性人畜共患致病菌，因其污染食品引起的李斯特菌病致死事件在欧美等国家时有发生〔4〕，我国尚未发现单增李斯特菌食物中毒的暴发流行，但已有该菌引起孕妇发病导致围产儿死亡的报道〔5〕。2000年，WHO的食品安全工作计划将单增李斯特菌列为重点检测的食源性疾病之一。单增李斯特菌广泛存在于自然界，如土壤、污水、青贮饲料、动物肠道，可能存在于农田到餐桌的任一环节。单增李斯特菌是一种革兰阳性、无芽孢、兼性需氧杆菌，对理化因子耐受性较强，能够在水分活度0.9的条件下生长，可以在低温、低pH、干燥环境中生长的特点使得这种细菌可以在其他微生物不能生长的食品加工和贮运环境中生存，是对食品卫生安全威胁最大的致病菌之一〔6－8〕。因此，在食品加工各个环节的消毒中，杀灭包括李斯特菌在内的各种食源性微生物是保证食品卫生的重要环节，而在这些环节的消毒中很少能物理方法，多数选择化学消毒法。本实验结果表明，过氧乙酸、过氧化氢、二氧化氯、次氯酸钠等四种常用消毒剂对单增李斯特菌具有良好的杀灭效果，有机干扰物能明显降低二氧化氯、次氯酸钠等消毒液的杀菌能力〔9〕，但对过氧乙酸、过氧化氢等消毒液杀菌能力影响较小。食品加工企业在进行卫生控制时，应先彻底清洗以排除有机干扰物对消毒剂杀菌效果的影响。在清洁条件下，过氧乙酸消毒液、二氧化氯消毒液、次氯酸钠消毒液在低浓度下即可快速杀灭单增李斯特菌;若清洁条件不佳，可以选择过氧乙酸消毒液来控制单增李斯特菌的污染。
作者：阙绍辉 宋金武 吴清平 邓金花 单位：广东环凯微生物科技有限公司
