1花青素概述
花青素(Anthocyanidin),又名花色素,是一种水溶性天然色素,属一种较常见的黄酮类化合物[1]。花青素是一种重要的天然着色剂,无论是在食品领域,还是在美容领域,又或者是在医药领域,均表现出了很好的应用前景;花青素由于具有非常强的抗氧化能力,因而能够在一定程度上清除人类机体中的自由基,使人体获得更为理想的免疫力,同时还具有一定的防癌抗癌作用;与此同时,花青素可以保护血管,优化血管机能,预防心脑血管疾病;还可以预防糖尿病,降低并发症发生率;除此之外,花青素还能够突破血脑屏障,在一定程度上改善退行性老年痴呆状况。
2研究蓝莓中花青素提取与检测技术的意义
现阶段,工业领域使用的色素通常为合成色素,大多具有一定程度的毒性,如果长期使用,有可能给人的身体健康带来严重威胁[2]。从植物中提取的花青素属于一种天然色素,副作用少,因而成了业界的热点研究之一。目前,国内市场上尚未开发出花青素纯品,因此,研究蓝莓中花青素提取与检测技术具有相当积极的现实意义,能够为花青素更广泛地应用于工业领域奠定坚实基础。
3蓝莓中花青素提取技术分析
3.1有机溶剂萃取法
对蓝莓中的花青素进行提取时,有机溶剂萃取法是一种比较常用的方法,现阶段的相关研究大多关注不同萃取剂所能够达到的提取效果,另外,新型萃取纯化方法的探索也是重要研究方向[3]。刘仁道等以蓝莓为对象,使用5种有机提取溶液对其中蕴含的花青素进行提取,并比较提取效果。5种有机提取溶液的详情如下(均为体积比):第一种,丙酮:水:甲酸=80:20:0.12;第二种,乙腈:乙酸=96:4;第三种,乙醇:水:乙酸=80:20:1;第四种,甲醇:水:乙酸=85:15:0.5;第五种,含0.1%HCL的甲醇。具体步骤如下:取100g原材料(蓝莓),使用打浆机做120s左右的粉碎处理,然后转移到高速匀浆机中在15000r/min状态下做120s的细胞结构破碎处理;量取1g破碎物并将其盛装在离心管中,然后添加14mL的提取液,紧接着进行1200s振荡并做离心处理(20000g,6000s),用045um的滤膜对上清液进行过滤,并对花青素进行测定;结果发现当甲醇:水:乙酸=85:15:0.15时,具有最为理想的提取效果。
3.2固相萃取提取法
Denev等通过固相萃取提取方法对蓝莓中的花青素进行了提取,固相萃取材料采用的是AmberliteXAD7,先使用重蒸水进行浸泡,接下来装填充柱,然后使用重蒸水对萃取柱进行冲洗,基于固相吸附原理实现对粗提物的萃取,通过重蒸水对杂质进行洗脱,直至观察不到不溶物洗出为止,与此同时,做好洗脱液的收集工作,接下来使用96％的甲醇溶液进行洗脱处理,如此一来,便能够收集到花青素的富集液。
3.3离子交换反相萃取法
He等对蓝莓中花青素进行提取时,使用了一种比较新颖的离子交换反相萃取技术。相较固相萃取技术而言,该项技术所提取的花青素拥有更为理想的纯度,最终得到的8种花青素,其纯度全部超过99％。在提取花青素的工作中,离子交换反相萃取法不仅具有明显的纯度优势,同时还具有明显的效率优势,不仅如此,由于回收率较高,还具有明显的低成本优势。
4蓝莓中花青素检测技术分析
4.1分光光度法
取制备的待检测样品1mL,然后添加4mLpH值大小为4.5的0.14moV/L乙酸钠缓冲液,待充分摇匀之后,转移到光路长为1cm的比色皿中,使用分光光度计在不同波长处(一个是520nm波长处,另一个是700nm波长处)对其吸光度进行测定。
4.2高效液相色谱法
以液相色谱仪为工具,对样品之中的花青素进行定量检测素,进样量控制为200uL,色谱柱采用的是InertsilODS23,流动相流速控制为1mL/min,温度始终控制为35℃;A、B泵的梯度情况如下:B泵0min时显示为0,55min时增长到55％,59min时增长到75％并持续4min,65min时减小到0并持续5min;对二极管阵列检测器进行设置时,应将其波长控制在250-600nm之间。
4.3气质联用法
Laroze等通过气质联用法对蓝莓中花青素进行检测,主要工具如下:1)Hew-lett—Packard5890-II气相色谱;2)60m×0.25mm×0.25umHP-Innowax毛细管柱;3)以He作载气。温度调整至45℃且维持30min,以3℃/min的速率逐渐提升到230℃,然后维持10min。质谱条件采用的是EI模式(电子能量的大小为70eV;源温度控制为250℃[4]),数据采集在扫描模式由30到300amu/s,1.9speetra/s。
5结束语
现阶段,国内蓝莓种植业已经形成一定规模,以蓝莓果实为原料的加工产业正处于快速发展之中,然而,国内蓝莓花青素的提取与检测尚没有真正走出实验室阶段。在此背景下,做好蓝莓中花青素的提取以及检测工作已然成为当务之急,具有相当积极的现实意义。
作者：孙莉 单位：呼伦贝尔市食药局
