［摘要］目的探讨人乳腺珠蛋白(hMAM)在乳腺癌早期诊断和预后判断中的作用。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定84例乳腺癌患者(实验组)和30例乳腺良性肿瘤患者(对照组)血清hMAM水平，应用受试者工作曲线确定cut-off值，比较两组hMAM水平的差异。通过随访资料比较hMAM和总生存期(OS)、无病生存期(DFS)的关系。结果本研究确定hMAM的cut-off值为7．18μg/L，血清hMAM水平筛查乳腺癌的敏感性和特异性分别为78．3%和86．7%．实验组的血清hMAM水平和阳性率明显高于对照组。在实验组患者中，血清hMAM的阳性率与临床分期、淋巴结转移和组织学分级相关，而与雌激素受体(EＲ)、孕激素受体(PＲ)和CerbB2无明显相关性。hMAM阳性表达与OS无明显相关性(P=0．160)，但hMAM阴性患者具有更好的DFS(P=0．012)。结论血清hMAM在乳腺癌患者中存在高表达，血清hMAM水平较低的患者具有更好的DFS，血清hMAM水平在乳腺癌早期诊断和预后判断中具有一定的潜在应用价值。
［关键词］人乳腺珠蛋白;乳腺肿瘤;酶联免疫吸附法
［中图分类号］Ｒ737．9［文献标识码］A［文章编号］1004-3101(2016)02-0138-03
乳腺癌已经成为全球女性发病率最高的恶性肿瘤，近年来我国乳腺癌的发病率也在逐渐提高［1］。虽然目前乳腺癌的诊断与治疗已经规范化，但能够广泛用于临床的早期诊断指标和预后判断指标仍需进一步探索。人乳腺珠蛋白(hMAM)于1996年首次被发现［2］，研究显示hMAMmＲNA可特异性地表达于乳腺组织［3］，被认为是潜在的乳腺癌血清型标志物。本研究通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测人外周血中hMAM的表达，探讨hMAM在乳腺癌早期诊断和预后判断中的价值。
1资料与方法
1．1研究对象
收集潍坊市人民医院乳腺外科2013年10月～2014年3月首诊并确诊为乳腺癌的患者84例为实验组，年龄29～81岁，中位年龄50．6岁。其中76例患者具有完整的随访资料，失访8例。收集同期首诊并确诊为乳腺纤维腺瘤患者30例为对照组，年龄18～58岁，中位年龄42．8岁。每一位患者均由我院病理科作出明确的病理诊断和临床分期等。
1．2标本采集及血清hMAM的测定
所有入组者均于未行任何穿刺或治疗(手术或化疗)前清晨采集静脉抗凝血2ml，分离血清，置于－20℃冰箱内待测。采用血清hMAM测定试剂盒(购自美国ＲD公司)通过酶联免疫吸附法(ELISA法)应用全自动酶标仪(美国THEＲMO公司)测定所有标本的血清hMAM水平。实验操作步骤严格按照试剂盒说明书要求进行，根据标准曲线计算各样本浓度值，单位为μg/L。
1．3统计学处理
采用SPSS18．0软件进行统计学分析。通过受试者工作特征曲线(ＲOC曲线)确定hMAM提示乳腺癌的临界值(cut-off值)，计算ＲOC曲线下面积、敏感性和特异性。应用独立样本t检验比较两组血清hMAM水平的差异，应用χ2检验比较两组血清hMAM阳性率的差异及hMAM和各项临床病理特征之间的关系，应用Kaplan-meier生存分析比较hMAM与OS，EFS之间的关系。
2结果
2．1ＲOC曲线评价hMAM水平
根据本组84例实验组患者和30例对照组患者血清hMAM水平绘制ＲOC曲线(图1)，其曲线下面积为0．851，其95%可信区间(CI)为0．770～0．931。根据约登系数，计算本研究中乳腺癌患者血清hMAM水平的cut-off值为7．18μg/L，血清hMAM水平筛查乳腺癌的敏感性和特异性分别为78．3%和86．7%，本研究以hMAM水平≥7．18μg/L为阳性结果。
2．2两组患者血清hMAM水平比较见表1。
2．3乳腺癌患者血清hMAM水平与其它临床病理特征之间的关系
临床观察表明，Ⅲ期、Ⅳ期乳腺癌患者血清hMAM阳性率明显高于Ⅰ期、Ⅱ期乳腺癌患者(P＜0．01)。淋巴结有转移的乳腺癌患者血清hMAM阳性率明显高于淋巴结无转移患者(P＜0．01)。但EＲ，PＲ，CerbB2阴性或阳性与血清hMAM阳性率之间均无明显相关性(P=0．051，P=0．142，P=0．788)，见表2。
2．4血清hMAM阳性率与OS和DFS的相关性
本组资料中乳腺癌组总的中位随访时间为20．9个月，中位生存期为48．1个月。结果显示，hMAM阴性乳腺癌患者与OS之间没有明显的相关性(P=0．160)。但是，hMAM阳性患者与DFS之间有明显的相关性(P=0．012)，见图2，3。
3讨论
乳腺珠蛋白于1996年被首次发现，与子宫球蛋白家族同源，其基因定位于染色体11q13。Wang等［4］和O＇Brien等［3］分别检测hMAM和hMAMmＲNA的表达水平，证明其在乳腺癌组织中过表达，而在非乳腺组织中低表达，提示hMAM具有乳腺组织特异性。Zach等［5］的研究显示，应用NestedＲT-PCＲ可在106～107个白细胞之间检测到1个肿瘤细胞，提示hMAM可作为一个检测乳腺癌微转移的敏感指标。而Fanger等［6］的研究显示乳腺癌患者血清中存在分泌型乳腺珠蛋白，证实了ELISA法检测乳腺癌患者hMAM水平的可行性。Bernstein等［7］同样应用了ELISA法来检测乳腺癌患者的hMAM水平，并通过ＲOC曲线得出血清hMAM浓度为8．8g/L水平时敏感度和特异度分别为68．8%和88．8%，提示可以通过设定合适的cut-off值来提高乳腺癌检测的灵敏度和特异度。本研究采用ELISA法检测血清hMAM水平，结果显示乳腺癌组的血清hMAM水平明显高于对照组，当设定cut-off值为7．18μg/L时，诊断乳腺癌的敏感度和特异度分别为78．3%和86．7%，具有较高的可信度，提示血清hMAM可以作为一种潜在的乳腺癌分子标志物应用于乳腺癌的早期诊断。hMAM表达与乳腺癌各项临床病理特征之间的关系，国内外的研究不尽相同。Núnez-Villar等［8］的研究结果显示hMAM的表达与EＲ，PＲ和Ki67密切相关，而与组织学分级、腋窝淋巴结转移和CerbB2无相关性。Ｒehman等［9］认为hMAM的表达与乳腺癌的病理类型有关，导管癌的阳性表达率明显较高。Bernstein等［7］则认为hMAM的表达与绝经状态、年龄、EＲ、PＲ和CerbB2均无明显相关。田英等［10］认为，hMAM的表达与临床分期、淋巴结转移密切相关，与组织学分级、EＲ、PＲ和CerbB2则无相关性。本研究结果表明，hMAM的表达与临床分期、淋巴结转移和组织学分级密切相关，与EＲ，PＲ，CerbB2则无相关性，与杨超［11］、吴敏等［12］的研究结果类似。分析造成国内外各研究结果差异的原因，可能与各研究入组病人的数量较少，检测方法尚无统一的标准等因素有关。提示有必要进行更大样本数的多中心研究，统一检测标准，以进一步明确hMAM表达与乳腺癌临床病理特征之间的相关性。目前国内外关于hMAM与OS和DFS的研究较少。Fortu-nato等［13］认为DFS与hMAM阳性表达呈负相关(P＜0．01)。本研究结果也显示，hMAM阴性的乳腺癌患者较hMAM阳性患者具有更好的DFS(P=0．012)，提示血清hMAM有可能作为判断乳腺癌预后的预测因子，具有潜在的临床意义。但是，本研究发现OS与hMAM不具有相关性，提示目前对hMAM分子作用机制的研究仍不清楚，尚待进一步研究。
作者：王会东 单位：潍坊市人民医院乳腺外科
