摘要：目的了解人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者/获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者相关支原体的感染情况对患者免疫功能的主要作用，为研究艾滋病患者免疫功能的影响因素提供依据。方法收集本县疾控中心所确诊的艾滋病患者102例，采用流行病学调查方法里的横断面调查法，对采集的所有患者血标本和尿标本进行实验室检查，检测标本中的支原体、细胞因子以及T淋巴细胞的数目。结果102例艾滋病患者中，艾滋病3种相关支原体的检出率分别为生殖支原体（Mg）20.59%、梨支原体（Mpi）13.73%、发酵支原体（Mf）25.49%；CD4+T细胞计数≥500（个/μl）的患者相关支原体的检出率远远高于CD4+T细胞计数<500（个/μl）的患者（P<0.05）；HIV感染者与AIDS患者艾滋病3种相关支原体检出率比较差异均有统计学意义（P<0.05）；艾滋病相关支原体感染患者白细胞介素-4（IL-4）水平与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平与未患有艾滋病相关支原体患者比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论艾滋病相关支原体的感染对于艾滋病患者本身免疫功能具有一定的影响。
关键词：艾滋病；支原体；免疫功能
艾滋病是由人类免疫缺陷病毒[1]（human immunodeficiency virus, HIV）引起的，是一种获得性的免疫缺陷疾病，该病无法治愈，一旦感染，结局只有死亡。当HIV病毒侵入人体后，大量繁殖，侵犯人体的免疫器官，引起人体免疫功能的下降，以致人体不能抵抗外界各种病毒和细菌的侵袭，从而各个系统受到严重感染，导致死亡。对于艾滋病患者，相关的支原体主要有以下3种：生殖支原体（mycoplasma genitalium, Mg）、梨支原体（mycoplasma pirum, Mpi）和发酵支原体（mycoplasma fermentans, Mf）[2]。为了探讨3种支原体感染与艾滋病患者病情发展之间的关系，明确细胞因子及免疫细胞在支原体感染后水平变化情况[3]，对本县疾控中心所确诊的102例艾滋病患者基本情况进行统计学分析和流行病学调查，具体内容如下。
1资料与方法
1.1研究的对象选取2011年5月‐2015年10月本县疾控中心确诊的102例艾滋病患者为研究对象，其中，艾滋病相关支原体感染患者61例，未感染者41例。HIV感染者57例，男31例，女26例；年龄19~45岁，中位年龄30岁。获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome, AIDS）患者45例，男25例，女20例；年龄20~47岁，中位年龄31岁。采用流行病学调查方法，运用国家标准的调查问卷形式，对其一般资料进行分析，主要内容包括患者年龄、性别、婚姻状况、健康情况、家庭住址、文化程度、接触史、感染史、用药史和治疗史等，HIV感染者与AIDS患者一般资料比较差异无统计学意义（P >0.05），具有可比性。1.2标本的采集方法在告知患者具体情况并获得患者同意的前提下，对所有患者进行血标本以及尿标本的采集，同时做好自身防护工作，避免感染；尿标本采集患者10~15 ml的首段尿，标明患者的姓名及编号，在常温下保存，送至惠州市疾控中心微检科进行支原体的检测；血标本采集患者静脉血3~5 ml,抗凝，标明患者姓名及编号，送至惠州市疾控中心微检科进行细胞因子和T林巴细胞的检测。1.3标本的处理1.3.1支原体的检测应用美国Stratagene公司生产的支原体测试试剂盒，将要进行支原体检测的尿标本放与离心管内，以3 500 r/min的速度进行离心，15 min后，弃离心管内上层液体，然后用1 ml生理盐水对离心管内液体进行沉淀溶解，充分混匀，冷藏于-20℃的环境备用，待裂解液配置好用于检测支原体核酸;裂解液主要是由浓度为1 mol/ L的氯化钾（KCl）溶液5 ml,浓度为1 mol/L的氯化镁（MgCl2）溶液0.25 ml,浓度为1 mol/L、pH值为8.0的三羟甲基氨基甲烷（tris hydroxymethyl aminomethane, Tris-HCl）缓冲液1.5 ml，20%的Tween-20溶液2.5 ml组成，然后用双蒸馏水定容至100 ml；检测前，以体积比为50∶2的比例进行裂解液与浓度为200 μg/ml的蛋白酶K进行混匀；吸取400 μl已解冻混匀的标本放置于离心管内，以15 000 r/min的速度进行离心，5 min后，弃上层液体，加入30 μl裂解液，混匀后放置于55℃的水中，1 h后，放入95℃水中，保温5 min，以10 000 r/min的速度进行离心，1 min后，离心管内的上清液即所要用于检测支原体的模板液；采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）技术进行支原体核酸检测，并统计检测结果。1.3.2CD4辨识蛋白特征的T细胞（clusterofdifferentiation4receptors,CD4+T）的检测选用BD公司生产的FAC-SCalibur机型（美国），采用流式细胞仪检测方法，在TruCOUNT绝对计数管中，将50 μl全血与20 μl MulitTEST四色试剂充分混匀，放在室内的阴暗处，待15 min后，向试管内加入450 μl溶血素，向另外3个TruCOUNT绝对计数管中分别加入50 μl TruCOUNT Control Beads作为绝对计数质控，然后在运行程序MulitTEST，进行上机检测。1.3.3细胞因子的检测应用eBiosecience公司生产的ELISA试剂盒进行检测（上海酶联生物科技有限公司生产），运用双抗体夹心的方法对细胞因子白细胞介素-2（interleukin-2, IL-2）、白细胞介素-4（interleukin-4, IL-4）、白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha, TNF-α）进行检测。严格按照仪器的使用说明进行操作，以标准曲线图为依据，找到标本中所对应的细胞因子的浓度。1.4观察指标比较所有患者体内艾滋病相关生殖支原体、梨支原体和发酵支原体的检出情况和水平变化；分析比较感染患者与未感染患者体内细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α和CD4+T细胞的水平。1.5统计学方法应用SPSS 16.0软件对数据进行统计学分析。结果中的计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验；中位年龄组间比较采用非参数秩和检验；计数资料采用χ2检验。P <0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1102例患者相关支原体检出情况比较102例患者3种相关支原体的检出率分别为生殖支原体（Mg）20.59%、梨支原体（Mpi）13.73%和发酵支原体（Mf）25.49%，见表1。2.2两组患者相关支原体检出率的情况的比较根据现有临床艾滋病的诊断要求，当CD4+T细胞计数超过500（个/μl）时，建议采取不治疗的方式，以此为依据将102例患者分成两组，一组为CD4+T细胞计数≥500（个/μl），另一组为CD4+T细胞计数<500（个/μl），比较两组患者相关支原体检出率的情况；两组患者相关支原体检出率比较差异有统计学意义（P <0.05），见表2。2.3感染相关支原体与未感染相关支原体患者细胞因子水平情况比较患有相关支原体感染患者白细胞介素-4（IL-4）水平高于未患有相关支原体的患者（P <0.05）；患有相关支原体感染患者肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平均低于未患有相关支原体的患者（P <0.05）；两组患者白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）水平比较差异均无统计学意义（P >0.05）。
3讨论
当HIV病毒侵入人体后，有几天至几年的潜伏期，艾滋病的症状并不表现出来。因此，当其他致病性微生物侵入人体，引起人的免疫反应时，会对艾滋病病程的进展起到一定作用，艾滋病相关支原体的感染就是一种途径[4]。判断艾滋病病程进展程度的可靠指标就是CD4+T细胞数目的多少 [5]，当CD4+T细胞数量多时，人体的免疫功能相对稳定，能在一定程度上抵抗致病性微生物的侵袭，当CD4+T细胞数目较少时，人体的免疫功能相对低下，容易加快艾滋病的进程，使潜伏期缩短甚至快速进入艾滋病急性感染期；相关文献报道，随着艾滋病病程的进展CD4+T细胞的数量明显减少，各个细胞因子之间的联系逐渐失衡[6]。以上均说明艾滋病相关支原体的感染与细胞因子以及CD4+T细胞水平的失衡有明显的联系，这可能使因为支原体的感染进一步影响了人体的免疫功能，从而造成了人体免疫系统的进一步失衡。本研究结果显示，102例艾滋病患者中，艾滋病3种相关支原体的检出率分别为生殖支原体（Mg）20.59%、梨支原体（Mpi）13.73%、发酵支原体（Mf）25.49%；CD4+T细胞计数≥500（个 / μl）的患者相关支原体的检出率远远高于CD4+T细胞计数<500 （个/μl）的患者（P <0.05）；HIV感染者与AIDS患者艾滋病3种相关支原体检出率比较差异均有统计学意义（P <0.05）；艾滋病相关支原体感染患者白细胞介素-4（IL-4）水平与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平与未患有艾滋病相关支原体患者比较差异均有统计学意义（P <0.05）。该结果与胡一珉等[6]研究结果类似，但由于该研究只是选取了本县102 例患者作为样本，具有样本容量过小、观察时间过短等缺点，无法确认艾滋病相关支原体感染与患者免疫功能之间的因果关系，无法判断支原体感染对于艾滋病进程的影响。综上所述，艾滋病相关支原体感染对患者的免疫功能具有一定的影响作用，但无法确定是由于支原体感染进而引起患者免疫系统的进一步失衡，还是因为艾滋病患者由于免疫功能的缺陷引起相关支原体的感染。为了更明确知道艾滋病相关病原体与患者免疫功能之间的因果关系，更准确的为艾滋病患者提供医学帮助，提高艾滋病患者的生存质量，后期还需要进行大容量、长时间的随访与调查，需要大量的研究数据来讨论并且阐明这种影响的机制和作用。
参考文献
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作者：骆玉萍 陈晓能 刘思超 单位：广东省惠州市博罗县疾病预防控制中心 惠州市疾病预防控制中心
