1提取和分离
枳壳药材25kg，粉碎，采用95%乙醇和70%乙醇浸渍法分别提取4次，提取液减压浓缩至无醇味，得总提取浸膏。向浸膏中加适量水分散，依次用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取，其中乙酸乙酯萃取物420g采用硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱)分离得24个流份，其中16号流份59g经硅胶柱(二氯-甲醇梯度洗脱)、制备HPLC以及羟丙基葡聚糖粒凝胶纯化得化合物1(100mg)，2(950mg)，3(347mg)，4(100mg)，7(170mg)，8(146mg);20号流份45g同样经硅胶柱(二氯-甲醇梯度洗脱)、羟丙基葡聚糖粒凝胶及制备HPLC纯化得化合物5(89mg);23号流份12.5g经开放ODS柱、制备液相及凝胶色谱分离以及纯化得到化合物6(25mg)，9(412mg)。
2结构鉴定
化合物1无色针状结晶(甲醇)。1H-NMR(CD3OD)δ:7.84(1H，d，J=9.6Hz，H-4)，7.45(1H，d，J=8.4Hz，H-5)，6.78(1H，dd，J=8.4，2.4Hz，H-6)，6.70(1H，d，J=2.4Hz，H-8)，6.17(1H，d，J=9.6Hz，H-3);13C-NMR(CD3OD)δ:162.3(C-7)，161.8(C-2)，155.8(C-9)，144.6(C-4)，129.2(C-5)，113.1(C-6)，111.7(C-3)，110.9(C-10)，102.0(C-8)。NMR数据与文献［3］一致，鉴定为伞形花内酯(umbelliferone)。化合物2白色簇晶(三氯甲烷)。ESI-MSm/z355［M+Na］+，1H-NMR(CDCl3，)δ:7.63(1H，d，J=9.2Hz，H-4)，7.36(1H，d，J=8.4Hz，H-5)，6.84(1H，dd，J=2.4，8.4Hz，H-6)，6.80(1H，d，J=2.4Hz，H-8)，6.23(1H，d，J=9.2Hz，H-3)，5.51(1H，brt，J=6.4Hz，H-2')，4.59(2H，d，J=6.4Hz，H-1')，3.34(1H，d，J=10.4Hz，H-6')，2.37(1H，m，H-5')，2.16(1H，m，H-5')，1.76(3H，s，3'-CH3)，1.63(1H，m，H-4')，1.47(1H，m，H-4')，1.20，1.16(each3H，s，7'-CH3);13C-NMR(CDCl3)δ:162.1(C-2)，161.3(C-7)，155.8(C-8a)，143.4(C-4)，142.2(C-3')，128.7(C-5)，118.9(C-2')，113.2(C-6)，112.9(C-3)，112.5(C-4a)，101.6(C-8)78.0(C-6')，73.1(C-7')，65.4(C-1')，36.5(C-5')，29.5(C-4')，26.5，23.3，16.8(-Me)。以上数据与文献［2］一致，鉴定此化合物为马尔敏(marmin)。化合物3淡黄色针晶(三氯甲烷)。ESI-MSm/z395［M+Na］+，1H-NMR(CDCl3)δ:8.14(1H，d，J=9.6Hz，H-4)，7.58(1H，d，J=2.4Hz，H-2')，7.14(1H，s，H-8)，6.94(1H，d，J=2.4Hz，H-3')，6.26(1H，d，J=9.6Hz，H-3)，5.58(1H，t，J=6.8Hz，H-2″)，4.94(2H，d，J=6.8Hz，H-1″)，3.31(1H，dd，J=10.4Hz，1.6Hz，H-6″)，2.35(1H，m，H-5″)，2.14(1H，m，H-5″)，1.70(3H，s，3″-CH3)，1.60(1H，m，H-4″)，1.43(1H，m，H-4″)，1.19，1.16(each3H，s，7″-CH3);13C-NMR(CDCl3)δ:161.2(C-2)，158.1(C-7)，152.6(C-9)，148.8(C-5)，145.0(C-2')，142.9(C-3″)，139.5(C-4)，119.3(C-2″)，114.3(C-6)，112.6(C-3)，107.5(C-10)，105.0(C-3')，94.3(C-8)，69.7(C-1″)，29.7(C-4″)，36.5(C-5″)，77.9(C-6″)，73.1(C-7″)，26.5，23.3，16.6(-CH3)。
以上数据与文献［4］一致，鉴定为6'，7'-二羟基香柠檬素(6'，7'-dihydroxybergamottin)。化合物4无色针状结晶(三氯甲烷)。1H-NMR(CD3OD)δ:8.32(1H，d，J=9.6Hz，H-4)，7.70(1H，d，J=2.4Hz，H-2')，7.05(1H，d，J=2.4Hz，H-3')，7.01(1H，s，H-8)，6.22(1H，d，J=9.6Hz，H-3);13C-NMR(C5D5N)δ:162.2(C-2)，159.1(C-7)，155.0(C-5)，145.8(C-2')，141.0(C-4)，114.5(C-6)，112.3(C-3)，106.3(C-10)，106.0(C-3')，92.4(C-8)。NMR数据与文献［4］一致，故鉴定为佛手酚(bergaptol)。化合物5白色块片状固体(甲醇)。ESI-MSm/z301［M+Na］+，1H-NMR(CD3OD)δ:7.83(1H，d，J=9.6Hz，H-4)，7.44(1H，d，J=8.4Hz，H-5)，7.00(1H，d，J=8.4Hz，H-6)，6.20(1H，d，J=9.6Hz，H-3)，3.66(1H，dd，J=9.2，3.2Hz，H-2')，3.00(2H，dd，J=13.2，3.2Hz，H-1')，3.94(3H，s，7-OCH3)，1.31(3H，s，4'-CH3)，1.29(3H，s，5'-CH3);13C-NMR(CD3OD)δ:162.3(C-2)，161.1(C-7)，153.3(C-9)，144.9(C-4)，127.0(C-5)，115.7(C-8)，112.9(C-10)，111.6(C-3)，107.6(C-6)，77.4(C-2')，72.7(C-3')，24.9(C-1')，24.2(C-4')，24.1(C-5')，55.3(7-OMe)。以上数据与文献［5］一致，鉴定为水合橙皮内酯(meranzinhydrate)。化合物6浅黄色针状结晶(甲醇)。1H-NMR(CD3OD)δ:7.62(1H，d，J=15.6Hz，H-3')，7.20(1H，brs，H-2)，7.09(1H，d，J=8.4Hz，H-6)，6.83(1H，d，J=8.4Hz，H-5)，6.33(1H，d，J=15.6Hz，H-2')，3.33(3H，s，-OCH3);13C-NMR(CD3OD)，δ:169.5(C-1')，149.1(C-3)，148.0(C-4)，145.5(C-3')，126.4(C-1)，122.5(C-6)，115.1(C-2')，114.5(C-5)，110.4(C-2)，55.1(-OCH3)。NMR数据与文献［6］基本一致，故鉴定此化合物为阿魏酸(ferulicacid)。化合物7白色针状结晶(甲醇)。1H-NMR(C5D5N)δ:7.73(1H，s，H-21)，7.64(1H，m，H-23)，6.53(1H，s，H-22)，5.75(1H，s，H-17)，5.23(1H，d，J=13.2Hz，H-19β)，4.70(1H，d，J=13.2Hz，H-19α)，4.65(1H，s，H-15)，4.31(1H，d，J=3.6Hz，H-1)，3.26(1H，dd，J=14.8，4.0Hz，H-6α)，3.21(1H，d，J=16.4Hz，H-2α)，3.09(1H，d，J=16.4Hz，H-2b)，2.82(1H，brd，J=11.2Hz，H-9)，2.66(1H，dd，J=15.6，3.2Hz，H-5)，2.57(1H，dd，J=14.4，3.2Hz，H-6b)，2.01(1H，m，H-12a)，1.86(2H，m，H-11，12b)，1.30，1.29，1.27，1.22(each3H，s，4×CH3);13C-NMR(C5D5N)δ:208.2(C-7)，170.6(C-3)，166.0(C-16)，144.1(C-23)，142.4(C-21)，121.6(C-20)，111.0(C-22)，80.8(C-4)，80.2(C-1)，78.6(C-17)，67.5(C-14)，66.2(C-19)，60.4(C-5)，55.2(C-15)，51.9(C-8)，48.5(C-9)，48.8(C-10)，38.9(C-13)，37.3(C-6)，36.9(C-2)，30.6(C-12)，30.3(C-29)，22.1(C-28)，20.8(C-18)，19.1(C-11)，18.1(C-30)。NMR数据与文献［7］一致，鉴定该化合物为柠檬苦素(limonin)。化合物8白色粉末。
1H-NMR(C5D5N)δ:5.39(1H，brs，H-6)，5.00(1H，d，J=8.0Hz，glc-H-1')，1.22～1.30(brs，n×CH2)，0.98(3H，s，H-19)，0.93～0.87(15H，m，5×CH3)，0.69(3H，s，H-18);13C-NMR(C5D5N)δ:173.9(C=O)，141.5(C-5)，122.3(C-6)，103.2(C-1')，79.2(C-2')，78.8(C-3)，75.5(C-4')，75.5(C-5')，72.1(C-3')，65.1(C-6')，57.4(C-14)，56.8(C-17)，50.9(C-9)，46.5(C-24)，43.0(C-13)，40.5(C-12)，39.8(C-4)，38.1(C-1)，37.4(C-10)，36.8(C-20)，34.9(C-2″)，34.7(C-22)，32.6(C-7)，32.5(C-14″)，30.8(C-8)，30.5(C-28)，30.5～29.9(C-14″～13″)，29.0(C-24)，27.9(C-2)，26.9(C-16)，25.8(C-3″)，24.9(C-15)，23.8(C-23)，23.3(C-15″)，21.8(C-11)，20.4(C-26)，19.9(C-19)，19.7(C-27)，19.5(C-21)，14.7(C-16″)，12.6(C-29)，12.4(C-18)。NMR数据与文献［8］一致，鉴定为胡萝卜苷棕榈酸酯(daucosterolpalmitate)。化合物9白色粉末。mp283～285℃，Molish和Liebermann-Burchard反应均呈阳性，TLC与胡萝卜苷对照品Rf值一致，且混合熔点不下降，故鉴定此化合物为胡萝卜苷(daucosterol)。
作者：邓可众 丁邑强 周斌 熊英 陈虹 单位：江西中医药大学 北京中医药大学 江西科技师范大学
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