1仪器与材料
1．1仪器
日本岛津LC-10ATVP型高效液相色谱仪。80-1型(最大20000转速)离心机，河南科尔仪器厂。Vortex-5漩涡混合器，上海其林贝尔仪器公司。FJ-200组织匀浆机，北京精科华瑞仪器公司。
1．2试剂
FATM，本实验室制备(批号:20100412)。甲醇(高效液相色谱纯)购自天津大茂化学试剂厂。冰醋酸(分析纯)购自广州化学试剂厂。
1．3动物
新西兰大白兔(2．5±0．25)kg，雌雄兼备，由广州市白云区穗北实验动物养殖场提供。分别饲喂标准实验室饮食，可自由饮水。
2方法
2．1药代动力学研究
取6只新西兰大白兔，实验前1d禁食12h，每只新西兰兔，按12mg/kg给予FATM，灌胃给药后，分别在第0、4、8、14、17、20、30、40、50、60、75、90、120min，于兔耳缘静脉取血(约5mL)，置于用肝素预处理过的离心管中。将血样以10000r/min转速离心5min，取上清液，分析。
2．2组织分布研究
取27只新西兰大白兔，每一测试时间点随机选取3只作为平行测定。实验前1d禁食12h，每只新西兰兔，按12mg/kg给予FATM，灌胃给药后，分别于10、20、30、40、50、75、120、180、240min处死，取其心、肝、脾、肺、肾、脑。精密取兔心、肝、脾、肺、肾、脑各1g(不足1g的取整个组织)，用生理盐水洗净，滤纸吸干，放置于小烧杯内，移液枪加入1．5mL双蒸水后，用FJ-200组织匀浆机匀浆制成组织匀浆液，用移液枪取匀浆组织100μL于0．5mL具塞离心管中，加入100μL色谱甲醇，在漩涡混合器涡旋2min后于高速离心机以15000r/min转速离心5min，上清液用0．22μm有机滤头过滤到0．5mL带塞离心管中，进样20μL于高效液相色谱仪进行分析。
2．3高效液相色谱分析
用高效液相色谱-紫外检测器对样本进行分析。SPD-10AVP紫外检测器，LC-10ATVP泵，用20μL的固定环和手动进样器。保护柱:PhenominexProdi-gyAnalyticalGuard(12．5mm×4．6mm)，色谱柱:A-polloC18柱(250mm×4．6mm)(Appllo，50194854)。色谱条件:甲醇-水(0．3%冰醋酸)(40∶60)，进样量:20μL，流速0．8mL/min，柱温:室温，检测波长为287nm。有效TMP在兔血浆中的线性浓度为0．1～3．0μg/mL，在0．2、1．0、2．0μg/mL浓度下，日内精密度分别为4．17%、2．27%、0．651%;日间精密度分别为7．48%、5．33%、2．27%。提取回收率为99．4%±3．4%、93．9%±3．0%、96．4%±6．0%;相对回收率分别为100.2%±2．2%、98．7%±2．1%、96．4%±3．8%。提取样品的制备:空白血浆中分别加入0．2、1．0和2．0μg/mL标准溶液以及无空白血浆的相当浓度的溶液样品。通过比较各色谱图中提取样品和溶液样品的峰面积计算TMP的绝对回收率。
3结果
3．1血浆药代动力学研究
按120mg/kg给予FATM，灌胃给药后，通过检测其代谢产物TMP在兔中血药浓度的数据，采用Kinet-ica计算其血浆药代动力学。实验表明，TMP在血浆中符合一室吸收动力学模型，权重系数为1/C。TMP的药代动力学参数如表2所示，所得的血药浓度-时间曲线图见图1。由图1中可知，TMP的T1/2α和T1/2β均约为0．27h;AUC为(1．91±0．28)μg·mL－1·h。
3．2组织分布研究
按120mg/kg给予FATM，灌胃给药，10、20、30、40、50、75、120、180、240min后，对心、肝、脾、肺、肾、脑样本进行了组织分布的分析。TMP在各组织中不同时间点的血药浓度见图2。TMP在各组织中的平均药-时曲线如图3所示。使用药动学软件Kinetica5．0的房室模型计算TMP在各组织种分布情况(见表3)。结果表明TMP广泛分布与各器官中，且分布较均匀，浓度最高的脏器为肝［(0．72±0．02)μg·mL－1·h］，其他依次为脾，肾，心，脑，在肺中未能检测出TMP。
4讨论
本文研究了灌胃给药后，FATM的代谢产物TMP在兔组织中的分布及药动学。采用HPLC检测TMP在血浆和组织中的样品。在药动学研究中TMP在兔血浆中符合一室吸收动力学模型，权重系数为1/C。使用Kinetica药动学软件计算出的房室模型参数如下:T1/2α和T1/2β均约为0．27h，Tmax为(0.39±0．02)h，Cmax为(1．81±0．14)μg/mL。根据Tmax的数值，表明FATM在兔体内吸收较快。由组织分布的研究结果表明，FATM广泛分布于各组织中。TMP在各组织的达峰时间约0．5h。据表3，肝脏中TMP的AUC最高，为(0．72±0．02)μg·mL－1·h，T1/2为(0．28±0．01)h，这表明FATM在肝脏的分布最多且消除快，说明其代谢主要在肝脏。TMP在在其他脏器中的AUC数值由高到低依次是脾，肾，心，脑。这也表明FATM主要分布于血流量大的器官中，与血液有良好的作用，能帮助改善血流循环。由表3可知，TMP在兔脑中的AUC值为(0．41±0．02)mg·L－1·h，说明FATM能透过血脑屏障，似乎此药物利于中风及其他脑部疾病的治疗。
5结论
药品在临床实验开发阶段中，其动物在体实验具有很强的代表性，动物模型可以有效地获得新药早期的药代动力学特征。基本的动物实验数据也能用于记录新型药物的吸收、分布、代谢和消除机制。因此，动物体内药动学评价的数据通常作为筛选新颖药物或优化其处方的依据，并指导最终产品剂型的整个设计过程。本研究所得到的动物药动学数据表明，FATM可在兔各个组织中快速分布并消除，表明FATM是一种很有前景的潜在药物。
作者：童春媚 单位：广东药学院
相关专题：肉类研究杂志 青岛理工大学研究生处
