1检测奥沙利铂对癌细胞周期的作用的方法
用流式细胞仪器进行分析。把浓度为71%的乙醇加入到取得的细胞中用PI进行染色30min。并用流式细胞仪器分析细胞周期的变化和肝癌细胞的死亡状况。检测奥沙利铂对基因蛋白的影响的方法用免疫组织化学方法，对细胞株进行特殊培养，观察其染色情况，按公式计算出相应的HSCORE得分。用SPSS14.0软件对数据进行分析，计量资料用（x±s）表示，用方差齐性检验（F)检验,P<0.05为差异有统计学意义[1]。
2结果
2.1奥沙利铂对细胞的作用
奥沙利铂能够有效抑制肝癌细胞的增长，而且对剂量有很强的依赖作用，药物的浓度越高，抑制作用越强；对时间也有依赖作用，抑制作用随着药物作用时间的增长而增长。即奥沙利铂的浓度不同或者时间作用不同对肝癌细胞产生的影响程度也不同。见表1。
2.2奥沙利铂对细胞株周期和死亡情况的影响
奥沙利铂对肝癌细胞作用时间达到24h后，癌细胞周期基本都停在了S周期；在作用时间达到48h后，细胞周期就被迫停在了S期和G2PM期之间，但仍主要在停在S期。而且奥沙利铂作用于肝癌细胞24h、48h后，肝癌细胞死亡率分别是6.27%、11.8%，由此可见，随着奥沙利铂作用时间的增长，肝癌细胞的死亡率也在增长。
2.3奥沙利铂对相关基因蛋白的影响
使用奥沙利铂后，CyclinA定位在胞核中;MTP53阳性表达见于胞核;Bc-l2、Bax及Fas定位在胞浆中;Myc的阳性表达于胞浆和胞核可见。奥沙利铂作用于癌细胞72h后,免疫细胞化学表CyclinA、Bax表达增强(P<0.03),MTP53、Bc-l2及Myc表达减弱(P<0.02),Fas表达差异无统计学意义(P>0.06)。见表2。
3讨论
在该研究中，采取了两种方法对奥沙利铂对癌细胞的作用进行了研究，有两个重大发现：一是药物作用于癌细胞48h后，将癌细胞阻断在S期和G2PM期之间，使癌细胞死亡率达到了11.8%；二是奥沙利铂浓度为16mol/L作用24h影响为（0.1898±0.056），浓度为升为128mol/L作用48h影响升为了（0.8176±0.0414）。实验表明：奥沙利铂对癌细胞有影响，能够将肝癌细胞全部停留在S期和G2PM期之间，并逐步产生作用，诱导肝癌细胞走向凋亡。且奥沙利铂对肝癌细胞起的作用大小呈现出对剂量、时间的依赖性。大量历史资料[2-3]表明：很多抗癌的药品不会直接消灭肝癌细胞而是通过诱导机制使其逐步走向死亡，因为抗癌药物在消灭癌细胞的同时可能会对正常的细胞产生不良作用。因而，研究新型的能诱导癌细胞自动凋亡的抗癌药物是现代抗癌治疗的新渠道。而奥沙利铂是第3代铂化合物，它能够中断DNA的合成，从而使癌细胞失去存活、增殖的基础，有效抑制癌细胞增长，诱导其凋亡。实验证明，奥沙利铂可以应用于肝癌的临床治疗，而且能够取得很好的效果，是未来抗癌的一种重要的药物。进一步对其进行开发研究，进行更多的实验福建职称验证，使其得到广泛的临床应用是医学界的重要课题。
作者：朴莲淑 王迎春 单位：大连大学附属中山医院消化内科
