1精密度
取线性关系下质量浓度为6μg/mL和36μg/mL的两对照品溶液，进样15μL，每个重复进样6次，得黄芩苷峰面积的RSD(n=6)为0.49%和0.79%，实验结果表明，此试验方法具有良好的精密度。稳定性取浓度为24μg/mL的对照品溶液，8h内每隔1h进样一次，每次进样15μL得黄芩苷峰面积的RSD(n=7)为0.67%，实验结果表明，被测溶液常温下放置8h内性质稳定。重复性精密称取同一批号6份样品，加甲醇溶解后进样15μL，每份进样两次得其峰面积的RSD为1.55%，实验结果表明，此试验方法具有良好的重复性。
2加样回收率
见表1。分别称取6份样品(每份0.20mg)于10mL容量瓶内，加适量甲醇后，加入线性关系考察项下各浓度对照品溶液各2mL，超声使全溶，放至室温后加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样15μL，每个样品进样3次，按回归方程求得黄芩苷的回收率。样品测定取生产批号为120910、120911和120912的样品进行测定，3批样品中黄芩苷含量分别为1.201mg/mg，1.176mg/mg，1.223mg/mg。
3讨论
3.1供试品溶液制备方法的选择2010版《中华人民共和国药典(2010年版)》[2]HPLC测定黄芩苷的含量时采用50%甲醇超声处理20min，文献报道也采用上述方法。实验中观察到，50%甲醇超声处理20min与用100%甲醇溶解超声所得色谱峰峰面积的结果无明显区别，而溶解操作更为简便易行，所以选择甲醇溶解对照品。
3.2检测波长的选择
本实验对黄芩苷对照品进行了200～500nm紫外光谱扫描，结果表明，黄芩苷在278nm处有较强吸收，315nm处有次强吸收，为了保证实验检测灵敏度，于是选择278nm作为检测波长。
3.3流动相的选择与影响
①表面活性剂的选择：本实验做的是O/W型微乳为流动相。O/W型微乳最常用的表面活性剂是SDS，也可以用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)[3]。SDS在微乳中的含量一般在1.75%～5.00%之间，虽然SDS含量在0.5%以上即可形成胶束，但低于1.75%，系统不能使油溶解，无法形成微乳。增加表面活性剂的含量能使溶质分散在大表面积的微乳液滴中并一起流向检测器，降低了溶质在固定相上的保留[4]。②助表面活性剂的选择：助表面活性剂一般为短链醇，实验表明，增加助表面活性剂的浓度，增大了流动相中有机溶剂的比例，降低了溶质的保留时间。③油相的选择：油相一般为短链的烷烃，常用的有庚烷、辛烷、己烷等。增加油的含量，流动相中的有机相的比例增加，溶质的保留时间降低。改变油相可改变疏水性物质的保留时间及其分离选择性，实验过程中分别考察了正辛烷、正庚烷、正己烷和环己烷为油相时，对分离结果的影响。结果表明，随着油相含量的增大，黄芩苷保留时间延长，除了正己烷外其他油相的组合的峰形效果都不佳。通过考察正己烷含量0.4%～1.4%(体积分数)对分离结果的影响发现，随着含量的增大，黄芩苷保留时间延长，然而由于过高含量也使得峰形不理想，当为0.8%(体积分数)时分离效果最为理想。与常规HPLC相比，MELC法不是简单的流动相的改变，具有其独特的分离机制和分析优势：①常规的分离的原理是基于溶质在流动相和固定相之间的分配比例不同而得到分离。而MELC中还存在第二种分离机制，即溶质在固定相、微乳连续相和微乳液滴之间的分配，这种独特的分离机制使得MELC能够实现脂溶性、水溶性、中性、阴离子、阳离子等化合物的同时分离；②微乳独特的两相组成：水溶性成份可溶于水相，脂溶性成份可溶于油性液滴；使得微乳具有极强的溶解能力，可以溶解蛋白，由于表面活性剂与固定相的作用，蛋白也不会沉积在固定相表面，在进行血药浓度检测时血清样品可直接进样分析；③由于微乳的极强溶解能力，在进行制剂分析时(如片剂、缓释制剂、膜剂等)，可以直接溶解样品进行分析，无需预处理；另外，对于在常规流动相中无法溶解的组分，可以采用MELC实现其分离测定；④梯度洗脱时微乳洗脱液的梯度可达100%，微乳和色谱柱固定相之间的相互作用特点，使微乳梯度洗脱时可避免两次进样间色谱柱的重新平衡；⑤微乳等度洗脱和梯度洗脱方式都可以在紫外末端吸收波长(190nm)检测，从而可以提高弱生色基团化合物的检测灵敏度。
作者：成晓岚 陶斯湄 单位：中山大学附属第三医院药剂科
