1资料方法
1．1患者纳入及排除标准
收集2010－2012年间兰州军区乌鲁木齐总医院肿瘤科患宫颈鳞状上皮细胞癌的病例共79例。每例宫颈癌均由组织活检确诊。所选病例在术前均未行化疗和放疗，并排除有糖尿病及其他代谢性疾病、其他肿瘤病史患者。此外还收集了宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasia，CIN）患者及正常人的资料及血清样品。分别收集宫颈癌及CIN患者的肿瘤组织、癌旁组织样本。癌旁正常组织定义为距离肿瘤边缘＞5cm的组织。正常对照为来院参加体检，年龄与肿瘤患者相匹配（±5岁）的健康女性。每例患者入院时记录身高、体重，用以计算身体质量指数（bodymassindex，BMI），BMI＝体重／身高2。
1．2Westernblot
所收集组织经研磨及超声裂解，将上清行蛋白定量后取等量总蛋白行SDS-PAGE电泳，电泳后将蛋白转移至NC膜上。将膜依次孵育一抗、二抗，最后用化学发光检测目的蛋白条带，每份样本重复检测3次。该实验中所用一抗为瘦素兔多抗（Peprotech，美国，500－P86），β-actin兔多抗（SantaCruzBiotechnology，美国）。HRP标记的羊抗兔二抗购于达科为公司。
1．3血清学检测
手术患者均在术前抽取静脉血。未手术患者及健康对照均在入院第1天采血。取血后血样以3000r／min的速度离心15min。取上清冻存于－80℃。用商品化的酶联免疫吸附法（ELISA）检测试剂盒（Peprotech，美国）检测宫颈癌、CIN患者及正常人血清瘦素水平。所有血清样本均在同一时间做复孔检测。
1．4统计学分析
由于瘦素在血清中的浓度呈偏态分布，用中位数及四份位间距描述数据分布趋势。未成对的组间比较采用Wilcoxon秩和检验。多组间的比较采用Kruskal-WallisH检验。P＜0．05为差异有统计学意义。
2结果
2．1基本资料
2年内共收集不同分级分期宫颈癌病例79例，平均年龄52．3岁。CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ患者分别为4、9、15例，平均年龄分别为47．5、49．7和51．6岁。正常对照组平均年龄50．8岁。BMI在宫颈癌组、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ组患者和正常对照组之间无统计学差异。
2．2瘦素在宫颈癌及CIN患者血清中的浓度变化
宫颈癌、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ患者血清中lepin的浓度呈递减趋势，其中位浓度分别为：13．83、9．37、8．50、8．01ng／mL。宫颈癌患者血清中瘦素浓度显著高于CIN患者（P＜0．05）及正常人（P＜0．05）。但是CIN患者体内的瘦素的浓度较正常人无显著性升高（P＞0．05），并且瘦素浓度在不同CIN分期患者体内无统计学差异（P＞0．05）。2．3瘦素在宫颈癌及CIN患者肿瘤组织中的表达Westernblot结果统计也可以观察到，宫颈癌组织中瘦素的表达水平大于CINⅢ或癌旁组织（P＜0．05）。
3讨论
宫颈癌在全球范围内是女性的最多发的肿瘤之一［8］。HPV感染是引起宫颈癌的确定危险因素，但是，单纯的HPV感染并不足以引发宫颈癌的发生。肿瘤的发生本身是一个多因素、多步骤的过程，众多因素可能参与其中。瘦素是由脂肪细胞分泌的一种细胞因子，瘦素通过与肥胖受体结合发挥维持正常能量平衡和体重的作用。瘦素的生物学功能较为广泛，如调节食欲、骨骼形成、促进生殖以及血管生成［7］。除此以外，瘦素与肿瘤的关系也受到越来越多的关注。一些影响肿瘤生成的因子，如胰岛素、糖皮质激素可促进瘦素的合成，而肿瘤微环境中的低氧状态则刺激瘦素的分泌［9］。我们的实验发现，宫颈癌患者血清中及肿瘤组织中瘦素的表达水平较CIN患者显著升高，提示瘦素可能参与了宫颈癌的发生、发展过程。瘦素通过与其受体胞外段的结合，启动下游的胞内信号转导。用瘦素处理胃癌细胞系能够促进STAT3和ERK1／2通路的磷酸化，促进胃癌细胞增殖，当用药物或小干扰RNA减少瘦素及其受体表达后，细胞增殖速度减慢［5］。在其他肿瘤类型中，瘦素也可能通过其他通路发挥促进细胞增殖的作用。例如，Mauro等［10］发现瘦素能在体内促进乳腺癌细胞系MCF-7细胞的增殖，而这一作用是通过E-cadherin和细胞周期蛋白D1的升高实现的。除了促进细胞增殖外，瘦素还能抑制细胞凋亡。Yuan等［11］通过免疫组化发现，瘦素的表达水平同宫颈癌的分级相关，用重组瘦素刺激Hela细胞后，细胞内的抗凋亡蛋白bcl-2、c-myc表达明显升高。由此推测瘦素是通过bcl-2、c-myc通路抑制宫颈癌细胞凋亡、促进其增值活性。Rouet-Benzineb则认为瘦素通过活化NF-κB抑制人结肠癌细胞系HT-29的凋亡。另外有一些文章报道瘦素能够调节血管生长。已有数据显示瘦素在某些肿瘤组织中能够靶向至血管内皮细胞，促进VEGF的表达，发挥其促进血管生长的作用［13］。瘦素在宫颈癌组织中高表达，癌旁组织中低表达的特性使瘦素可能成为肿瘤治疗的靶分子。实验证实，不论是否表达雌激素受体，瘦素或其受体的拮抗剂可有效抑制乳腺癌组织的生长，发挥抗瘤活性［14］。
我们的研究提示了瘦素成为宫颈癌肿瘤标志物分子的可能性及其可能参与了宫颈癌的发病过程，并且瘦素与宫颈癌之间的相关性不受BMI的影响，为进一步研究瘦素与宫颈癌之间的关系打下了基础。由于病例数有限，我们并未对宫颈癌进行具体的分级分期，因经济管理论文此实验需要更大规模样本的证实。此外，瘦素在宫颈癌中是以何种方式、信号通路参与肿瘤的发生发展的，值得进一步的研究。
作者：张婧 单位：兰州军区乌鲁木齐总医院
