本文作者：杜超；蒋明德；曾维政；郑淑梅；成功正常投稿发表论文到《中国组织工程研究》2014年49期,引用请注明来源400期刊网！

【摘要】：背景:基质金属蛋白酶1能够降解以Ⅰ型胶原为主的细胞外基质,有望逆转纤维化组织。目的:利用Gateway技术构建含人基质金属蛋白酶1基因的重组腺病毒载体,并观察其在体外降解Ⅲ型胶原蛋白的能力。方法:从携带人基质金属蛋白酶1基因片段的pcDNA3.1质粒中PCR扩增出人基质金属蛋白酶1基因片段,双酶切连接入门载体pENTERTM1A形成入门克隆,利用LR反应与目的载体pJTITMR4DestCMV-N-EmGFPpAVector同源重组构建表达克隆pAd-hMMP-1-eGFP。经PacⅠ酶切线性化转入HEK293A细胞包装获得重组腺病毒Ad-hMMP-1-eGFP,RT-PCR及Western-Blot法分别检测目的基因与蛋白表达。细胞分为3组:1空白对照组:HEK293A细胞。2AD-EGFP组:Ad-eGFP感染HEK293空白对照组。3AD-HMMP1-EGFP组:Ad-hMMP-1-eGFP感染HEK293空白对照组。分别加入相同含量Ⅲ型胶原蛋白,在24,48,72h用ELISA试剂盒检测Ⅲ型胶原蛋白水平。结果与结论:经酶切及测序鉴定证实入门载体和目的载体中均含有人基质金属蛋白酶1目的基因。重组腺病毒Ad-hMMP-1-eGFP感染293A细胞后4d观察到绿色荧光表达,10d荧光强度达最高,12d收集病毒液;测定病毒滴度为4.84×1010PFU/mL,Western-Blot法检测目的蛋白高效表达。随时间延长,空白对照组和AD-EGFP组胶原蛋白含量无明显变化,AD-HMMP1-EGFP组24,48,72h胶原蛋白降解率分别为24%,56%,81%,与空白对照组、AD-EGFP组相比AD-HMMP1-EGFP组降解胶原效果显著(P0.01)。利用Gateway技术成功构建含人基质金属蛋白酶1基因的重组腺病毒载体,与传统构建方法相比具有高效性和特异性,分泌基质金属蛋白酶1检测其降解Ⅲ型胶原蛋白效果显著。
【论文正文预览】：川省成都市人,汉族,2012年解放军第三军医大学毕业,硕士,主治医师,主要从事肝硬化的基础与临床研究。通讯作者:蒋明德,硕士,主任医师,解放军成都军区总医院消化内科,四川省成都市6100832014.49.022[http://www.crter.org](2014)49-07995-06稿件接受:2014-09-24DuChao,Master,
【文章分类号】：R575.2
【稿件关键词】：基质金属蛋白酶病毒胶原Ⅲ型实验动物组织工程人基质金属蛋白酶基因Gateway技术重组腺病毒载体Ⅲ型胶原
【参考文献】:

【稿件标题】：[伊视清基质蛋白酶论文]构建人基质金属蛋白酶1基因重组腺病毒载体及体外降解Ⅲ型胶原的检测
【作者单位】：解放军成都军区总医院消化内科;
【发表期刊期数】：《中国组织工程研究》2014年49期
【期刊简介】：《中国组织工程研究》杂志是由中华人民共和国新闻出版总署、正式批准公开发行的优秀期刊，中国组织工程研究杂志具有正规的双刊号，其中国内统一刊号：CN21-1581/R，国际刊号：ISSN2095-4344。中国组织工程研究杂志社由中华人民共和国卫生部主管、主办，本刊为......更多中国组织工程研究杂志社(http://www.400qikan.com/qk/6322/)投稿信息
【版权所有人】：杜超；蒋明德；曾维政；郑淑梅；

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